大红树内生真菌多样性及次级代谢产物研究

来源 :海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aptxkid2009
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红树林植物(Mangrove plants)是一类十分特殊的海洋生物,由于其生长环境的特殊性,使得红树林植物内生真菌种类丰富,构成了海洋真菌的第二大生态群。本研究以红树林植物大红树作为研究对象,从大红树的根、茎、叶和花四个部位中分离得到内生真菌,筛选得到优势菌株,对其代谢产物进行分离、结构鉴定和活性评价,从而为药物先导化合物的开发提供理论基础。(1)大红树内生真菌分离、鉴定和多样性分析。以大红树的根、茎、叶和花四个部位为材料,从其组织块中总共分离得到97株内生真菌,通过形态学和分子生物学鉴定,这些内生真菌分属于6个目,8个科,12个属,20个种。其中毛色二胞属Lasiodiplodia sp.和间座壳属Diaporthe sp.是大红树内生真菌的优势菌种。(2)内生真菌生物活性筛选和发酵培养基优化。选取16株具有代表性的真菌,采用四种培养基对内生真菌进行发酵培养,用乙酸乙酯浸泡提取,获得粗提物。通过内生真菌的抗菌、抗肿瘤活性以及TLC和HPLC对内生真菌进行综合筛选。抗菌结果显示,在所选取的16株内生真菌中,有14株内生真菌的发酵提取物对四种指示菌中的一种或多种具有抑菌作用。Phomopsis asparagi和Pestalotiopsis sp.的发酵提取物对白色念珠菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、粪肠球菌三种指示菌均有抑制作用,且只有这两株内生真菌对粪肠球菌有抑制作用。内生真菌Phomosis asparagi的大米培养基发酵产物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌Methicillin-resistant Staphylococcus aureus表现出了极强的抗菌活性,MIC值为0.06 mg/mL,对粪肠球菌Enterococcus faecalis的MIC值也达到了 0.12 mg/mL,察氏培养基发酵产物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的MIC值为0.25 mg/mL。抗肿瘤结果显示,16株内生真菌中,发酵提取物同时对两种细胞都有抑制作用的内生真菌有5株,分别为Neopestalotiopsis protearum、Pestalotiopsis microspora、Phomopsis asparagi、Phomopsis longicolla、Phomopsis sp.。TLC和HPLC筛选结果显示,Phomopsis asparagi分泌代谢产物的类型最为丰富。综合化学和生物活性综合筛选的结果,最终确定大红树内生Phomopsis asparagi真菌作为下一步的研究对象。(3)大红树内生Phomopsis asparagi次级代谢产物分离、鉴定和生物活性评价。将目标菌株进行大量发酵培养,乙酸乙酯浸泡获得粗提物,采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析、C18反相柱层析、HPLC等多种分离方法对浸膏进行分离纯化。总共分离得到14个化合物,包含8个细胞松弛素类化合物和6个聚酮类化合物,其中化合物1、3、6是新化合物。对化合物1-6进行生物活性评价,结果显示,其具有抗肿瘤活性。
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