【摘 要】
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目的:观察电针情感区后的血管性痴呆大鼠行为学的改变,海马CA1区细胞形态的变化以及对炎症反应相关蛋白TNF-ɑ和TGF-β的表达影响。探讨电针情感区治疗血管性痴呆的作用机制,为临床治疗血管性痴呆患者提供实验依据。方法:随机选取70只SD雄性大鼠进行本次实验,分为空白组、假手术组,模型组和治疗组4组。造模前进行Morris水迷宫检测,符合纳入标准的大鼠开始本次实验,共计64只。其中空白组不予以任何处
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目的:观察电针情感区后的血管性痴呆大鼠行为学的改变,海马CA1区细胞形态的变化以及对炎症反应相关蛋白TNF-ɑ和TGF-β的表达影响。探讨电针情感区治疗血管性痴呆的作用机制,为临床治疗血管性痴呆患者提供实验依据。方法:随机选取70只SD雄性大鼠进行本次实验,分为空白组、假手术组,模型组和治疗组4组。造模前进行Morris水迷宫检测,符合纳入标准的大鼠开始本次实验,共计64只。其中空白组不予以任何处置,假手术组仅暴露动脉三角,分离颈总动脉和迷走神经,模型组采用改良的2-VO阻断法建立血管性痴呆模型。术后一周进行Zea-longa神经功能缺失评分测试以及Morris水迷宫检测,记录每组大鼠的实验数据,用以判定模型复制是否成功。治疗组根据孙申田老师针治经验选取大鼠情感区进行电针治疗,选用安迪牌0.35×13mm针灸针,疏密波,电流强度1-2m A,治疗时间为每日上午9:00-10:00,每次30min,周期为14天。治疗后,对各组大鼠进行Morris水迷宫检测,初步验证治疗效果。检测结束后,对各组大鼠大脑进行取材。通过HE染色观察各组大鼠的细胞形态学表现,免疫组化,ELISA和western blot观察TNF-ɑ和TGF-β的蛋白表达含量变化。结果:1.神经功能缺失评分:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分升高,差异具有显著性（P＜0.05）;与模型组相比,治疗组大鼠神经功能缺损评分降低,差异具有显著性（P＜0.05）。2.行为学检测结果:（1）定位航行实验中,造模前各组间大鼠Morris水迷宫测试,逃避潜伏期比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。随着游泳时间及次数的增加,各组大鼠的逃避潜伏期均呈下降趋势;与假手术组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期以及游泳路程延长（P＜0.05）;与模型组相比,治疗组大鼠的逃避潜伏期以及游泳路程缩短（P＜0.05）。（2）空间探索实验中,造模前各组间大鼠Morris水迷宫测试,首次抵达平台时间及穿越平台次数比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。随着游泳时间及次数的增加,各组大鼠的首次抵达平台时间缩短且穿越平台次数均呈上升趋势;与假手术组相比,模型组大鼠的首次抵达平台时间增长且穿越平台次数减少（P＜0.05）;与模型组相比,治疗组大鼠的首次抵达平台时间缩短且穿越平台次数增多（P＜0.05）。3.HE染色检测结果:显微镜下观察各组大鼠海马区切片CA1区锥体细胞形态,神经细胞核呈浅蓝色,细胞质呈粉红色。空白组大鼠海马体CA1区神经元结构清晰完整,排列整齐紧密,细胞核规则且大而圆润,分布均匀,无神经元丢失迹象。假手术组大鼠海马体CA1区神经元结构较清晰完整,排列较整齐紧密,细胞核较规则且大而圆润,分布均匀,大体无神经元丢失迹象。模型组大鼠海马体CA1区神经元结构欠完全,边缘不清晰,形态不规则,锥体细胞排列杂乱无章,细胞间质水肿程度显著,细胞核有固缩深染现象,海马体细胞带显著增宽,神经元丢失明显。治疗组大鼠海马体CA1区神经元结构相对清晰完整,形态较为规则,排列相对均匀,细胞间质水肿程度低于模型组,且细胞核固缩程度减轻,细胞带断裂减少,神经元丢失减少。4.免疫组化检测结果:与假手术组相比,模型组大鼠海马体内的TNF-ɑ数量增多,透光度显著升高差异具有统计学意义（P＜0.05）,TGF-β数量减少,透光度显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,治疗组大鼠海马体内的TNF-ɑ数量减少,透光度显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）,TGF-β数量增多,透光度显著升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。5.ELISA检测结果:与假手术组相比,模型组大鼠海马体内的TNF-ɑ表达量增多,TGF-β表达量减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,治疗组大鼠海马体内的TNF-ɑ表达量减少,TGF-β表达量增多,差异具有统计学意义（P＜0.05）。6.western blot结果:与假手术组相比,模型组大鼠海马CA1区TNF-ɑ灰度值升高,蛋白相对表达量增多,TGF-β灰度值降低,蛋白相对表达量减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,治疗组大鼠海马CA1区TNF-ɑ灰度值降低,蛋白相对表达量减少,TGF-β灰度值升高,蛋白相对表达量增多,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.电针情感区治疗血管性痴呆大鼠,可以改善大鼠学习记忆能力以及减轻神经元损伤,保护CA1区神经元形态结构,减少TNF-ɑ蛋白表达,增加TGF-β蛋白表达,降低炎症反应发生率,起到保护脑神经元的作用。2.电针情感区对血管性痴呆的调控作用揭示了本病治疗的新策略,为进一步研究炎症反应与神经退行性病变之间的相互作用奠定了基础。
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