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谷氨酰胺为条件性必需氨基酸，其在生物体代谢过程中起重要的作用，但Gln的难溶性和不稳定性限制了它在人类临床和动物生产上的推广。为了克服Gln这些缺点，人们主要采用Gln结合肽。目前临床上使用的主要是人工合成Ala-Gln和Gly-Gln，价格昂贵，极少在动物生产中使用。小麦面筋蛋白的Gln含量丰富，本实验通过酶解小麦面筋蛋白制取畜含Gln蛋白酶解物，旨为畜牧生产提供一种经济有效的Gln替代物。 一、面筋蛋白水解酶的选择 选取食品级蛋白酶：胰蛋白酶、胃蛋白酶、ProtamexTM复合蛋白酶、Alcalase碱性蛋白酶3.0T、Neutrase中性蛋白酶1.5MG和FlavourzymeTM复合风味蛋白酶1000MG以确定蛋白酶对酰氨基的水解能力。各个单酶在适宜的条件下水解面筋蛋白4h后取样．实验采用双（1，1-三氟乙酸基）碘苯（BTI）保护肽中结合Gln，通过测定肽中Glu含量间接测定Gln。以邻苯二甲醛（OPA）为衍生剂，柱前衍生，反相高压液相C18柱分离；pH6.85磷酸缓冲溶液，甲醇二元梯度洗脱，340nm紫外检测。结果显示胰蛋白酶、胃蛋白酶和ProtamexTM复合蛋白酶对酰氨基的水解能力较小，对酰氨基的破坏率分别为2.79％，1.90％，5.80％，均小于Neutrasc中性蛋白酶1.5MG的32.25％，Alcalase碱性蛋白酶3.0T的26.55％和FlavourzymeTM复合风味蛋白酶1000MG的16.38％。 实验表明选择胰蛋白酶、胃蛋白酶和ProtamexTM复合蛋白酶可作为制备Gln结合肽的蛋白酶。 二、谷氨酰胺结合肽的制备 首先确定三种单酶各自对面筋蛋白适宜的初始pH，温度，酶浓度和底物浓度。经测定，胰蛋白酶的水解条件为pH8.0，50℃，酶浓度（E％）=9％（w/w），底物浓度（S％）=12.8％（w/v）；胃蛋白酶为pH2.0，40℃，E％=5％（w/w），S％=16.0％（w/v）；ProtamexTM复合蛋白酶为pH7.0，40℃，E％=8％（w/w），S％=12.8％（w/v）。其次以双酶进行两两组合水解。在进行水解度控制实验时取样，分析水解液中氨基氮的含量，计算平均肽链长度。实验表明胰蛋白酶和胃蛋白酶联合水解的效果最好，条件为在单酶的最适环境下，胰蛋白酶水解6h，再用胃蛋白酶水解5h，可得到平均肽链长度为2.20个氨基酸残基杨得胜:谷氮酸胶结合肚的高效制备的蛋白水解液.三、结合肤中谷孰酸胺的测定 在测定单酶或双酶组合水解面筋蛋白水解度的同时取样，用高效液相色语分析水解液中Gln的得率.胰蛋白酶、胃蛋白醉和Pr。t amex侧复合蛋白酶单酶水解面筋蛋白8h后Gln的得率分别为”.86%，87.7。%，69.58%.双醉组合水解过程中胰蛋白酶和P rotamex侧复合蛋白酶混合酶解的Gln得率最低，仅为39.52%.，而胰蛋白酶和胃蛋白醉联合水解的Gln得率最高，为60.43%.