【摘 要】
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近年来,诸如姜黄素、槲皮素等酚类水不溶性生物活性化合物的封装和递送越来越受到关注。常用的是将生物活性化合物或药物封装在由合成聚合物、天然聚合物（蛋白质和多糖）组成的载体中。这些生物活性化合物通常通过疏水相互作用与载体结合,因此具有更多疏水结构域的蛋白质非常适合作为载体。卵黄颗粒是由蛋黄通过简单的稀释离心获得的沉淀性蛋白质组分。卵黄颗粒营养丰富,且较于全蛋黄,其拥有更高的蛋白质含量及更低的脂质和胆固
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近年来,诸如姜黄素、槲皮素等酚类水不溶性生物活性化合物的封装和递送越来越受到关注。常用的是将生物活性化合物或药物封装在由合成聚合物、天然聚合物（蛋白质和多糖）组成的载体中。这些生物活性化合物通常通过疏水相互作用与载体结合,因此具有更多疏水结构域的蛋白质非常适合作为载体。卵黄颗粒是由蛋黄通过简单的稀释离心获得的沉淀性蛋白质组分。卵黄颗粒营养丰富,且较于全蛋黄,其拥有更高的蛋白质含量及更低的脂质和胆固醇含量,作为一种新兴的生物材料越来越受到关注。但由于卵黄颗粒尺寸较大且静电斥力不足,在中性p H下的溶解度较低,这严重限制了其在生物活性化合物递送中的应用。本文通过在中性条件下加入Na Cl/（Na PO3）6调控卵黄颗粒的自组装以实现其对姜黄素的包埋。研究结果如下:1、以卵黄颗粒为研究对象,研究了p H对蛋白质-盐的相互作用的影响。通过外观图、流体动力学直径研究了不同盐离子（Na Cl、KCl、Li Cl、Cs Cl）对卵黄颗粒结构的影响,并进一步通过游离Ca2+浓度、卵黄颗粒形态和疏水性研究了Na Cl对卵黄颗粒结构的影响。研究结果表明:盐离子对不同p H条件下卵黄颗粒的结构存在不同的影响,即在p H 4.0-7.0下破坏磷钙桥,使得卵黄颗粒解离,且这种活性在p H 6.0和7.0时更有效。在p H 2.0和3.0时添加盐离子会导致解离的卵黄颗粒重新聚集。然而,在p H值7.0-10.0时,盐离子不会引起解离卵黄颗粒的显著聚集。同时不同p H及Na Cl浓度下Ca2+浓度的研究进一步证实了这一效应。芘测定证实了卵黄颗粒作为疏水性生物活性化合物在高离子强度下递送载体的潜力。2、探究了卵黄颗粒作为亲脂性生物活性化合物单一载体的潜力。姜黄素被选为模型亲脂性生物活性化合物。在中性条件下通过加入Na Cl调节卵黄颗粒自组装来包封姜黄素,并对卵黄颗粒-姜黄素纳米粒子的理化性质和形态结构进行了表征。研究结果表明:2%卵黄颗粒在加入1M Na Cl后对1.0 mg/m L姜黄素的包埋率可达到69.8±1.3%;通过荧光光谱、傅里叶变换红外光谱证明了姜黄素和卵黄颗粒之间通过疏水相互作用结合。差示量热扫描图谱进一步证实了被包埋的姜黄素处于非定型形态。同时进行了卵黄颗粒-姜黄素纳米粒子的自由基清除实验,发现包埋的姜黄素清除自由基对的能力较非包埋的姜黄素持平或有显著提升;HT-29细胞株的抗增殖实验表明经卵黄颗粒包埋后姜黄素的抗细胞增殖能力增强,当添加量为30μg/m L时,HT-29细胞的存活率降低到30%;Caco-2细胞利用率实验表明姜黄素被卵黄颗粒包埋后更容易被细胞吸收利用。3、研究在中性条件下加入钙离子螯合剂（Na PO3）6实现卵黄颗粒的可控自组装进行包封姜黄素,并探索了卵黄颗粒解离程度和包封姜黄素生物活性的构效关系。研究结果表明:卵黄颗粒在p H 7.0下的粒径随（Na PO3）6浓度的增大而减小并趋于稳定;通过SDS-PAGE凝胶电泳发现（Na PO3）6的加入并未改变卵黄颗粒的蛋白质结构;荧光光度分析表明卵黄颗粒和姜黄素的结合位点和结合常数随着温度的升高而增加;且在不同温度下的熵变（ΔS）和焓变（ΔH）均大于0,说明两者之间通过疏水相互作用结合。（Na PO3）6的加入使得2.0 wt.%卵黄颗粒在p H 7.0时对1mg/m L姜黄素的包埋率达到80.5±0.8%,相较第二章的方法有进一步提升;傅里叶变换红外光谱和X射线衍射证明了姜黄素被成功包埋;DPPH和ABTS自由基清除能力证实姜黄素在包埋过程中结构和性质并未被破坏;卵黄颗粒-姜黄素纳米粒子的生物利用率通过HT-29细胞的细胞毒性实验证实,研究结果表明;加入相同浓度的姜黄素,粒径小的卵黄颗粒-姜黄素纳米粒子中的姜黄素更易于被细胞吸收进而抑制细胞增殖。
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