饮水锶对水蚤生存期及小鼠抗氧化机制影响研究

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目的:饮水中矿物质与人类寿命有关,为了解饮水中矿物质种类、数量、比例对人类生命周期的影响,通过观察水中锶对水蚤生存期的影响,并以水蚤和小鼠为研究对象深入探究其影响机制,进一步阐明饮水中矿物质对水蚤生存期的调控作用,为研究水与人类健康长寿提供科学理论基础。方法:1.通过观察水蚤品种之一蚤状溞在五种饮用水(纯水、自来水、富氢水、过滤水、矿泉水)中的生存期,并测定五种饮用水的水质指标及水中常见矿物元素含量,通过分析后发现影响蚤状溞生存期的矿物元素锶。2.以蚤状溞为生物模型,进一步观察不同浓度锶对生存期的影响验证第一部分的发现并主要从抗氧化角度探究其相关影响机制。以一日龄蚤状溞设置系列锶浓度组进行生存期观察,同期设置自来水组、纯水组作为对照。根据生存期结果进一步设组,测定7日龄、14日龄、21日龄蚤状溞的体长及心率及蛋白质含量、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢(CAT)酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢(H2O2)含量。3.以小鼠为干预对象,进一步探究饮水锶对小鼠体内抗氧化系统的调控作用。取80只三周龄清洁级ICR小鼠,根据国家天然矿泉水安全限量标准随机设置纯水组及0.5mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L三个锶浓度组,锶溶液以纯水配置。每组设鼠20只,雌雄各半,对应纯水及各浓度锶水为唯一水源饲养60天。记录每日摄食摄水量,每周体重变化,实验期结束后取小鼠血清测定总抗氧化能力(T-AOC)、羟自由基抑制率、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MAD)含量。取肝脏、心脏、肾脏组织测定总抗氧化能力(T-AOC)、羟自由基抑制率、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MAD)含量、过氧化氢(H2O2)含量。用RT-PCR方法测定心、肝、肾脏组织中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶1(GSH-Px1)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因的RNA表达量。用Elisa方法测定心、肝、肾组织中的烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)和烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶(NMNAT1)含量。用Western blot方法测定肝脏组织中凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved caspase-3的含量。结果:1.(1)纯水、富氢水、过滤水、自来水、矿泉水五种饮用水组中矿泉水组蚤状溞生存期最长,与其它组差异有统计学意义(P<0.05)。(2)水质分析结果显示矿泉水中锶元素含量远高于其余四种饮用水,提示锶元素可能延长蚤状溞生存期。(3)以纯水组和自来水组为对照,水中0.1mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L锶浓度显著延长了蚤状溞生存期(P<0.05),证实了水中锶确实可延长蚤状溞生存期。2.干预至7日龄时,0.1、0.2、0.4、1.0mg/L锶浓度组中溞T-AOC显著高于PWC组(P<0.05),0.4mg/L锶浓度组SOD酶活性显著高于PWC组(P<0.05),0.2mg/L与2.0mg/L锶浓度组的POD酶活性显著高于PWC组(P<0.05),0.4mg/L锶浓度组POD酶活性显著低于PWC组(P<0.05),0.1mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L锶浓度组中溞MDA含量显著低于PWC组(P<0.05)。干预至蚤状溞14日龄时,0.1mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L锶浓度组中溞T-AOC显著高于PWC组(P<0.05),0.1mg/L-0.8mg/L四个锶浓度组中溞SOD酶活性均显著高于PWC组(P<0.05),各含锶组溞MDA含量显著低于PWC组(P<0.05)。干预至21日龄时,0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L锶浓度组中蚤状溞T-AOC显著高于PWC组(P<0.05),0.1mg/L、0.2mg/L、0.8mg/L锶浓度组中溞SOD酶活性显著高于PWC组(P<0.05),0.4mg/L与2.0mg/L锶浓度组溞POD酶活性显著高于PWC组(P<0.05),各含锶组溞MDA含量显著低于PWC组(P<0.05)。此外,0.1mg/L-0.8mg/L四个锶浓度干预至蚤状溞7、14、21日龄时相较PWC组均显著增强CAT及GSH-Px酶活性(P<0.05)。3.(1)2.5mg/L锶浓度组小鼠血清T-AOC高于PWC组(P<0.05)。(2)各锶浓度组小鼠心、肝、肾脏中T-AOC、羟自由基抑制率、POD酶活性以及肾脏SOD酶活性、心脏和肾脏GSH-Px酶活性、心脏和肝脏CAT酶活性均无差异(P>0.05)。0.5、2.5、5.0mg/L锶浓度组小鼠心脏和肝脏SOD酶活性显著高于PWC组(P<0.05)。2.5mg/L和5.0mg/L锶浓度组小鼠肾脏CAT酶活性显著高于PWC组(P<0.05)。(3)0.5mg/L锶浓度组小鼠心、肾、肝脏中CAT、Mn-SOD、GSH-Px1基因m RNA表达量与PWC组相比均无显著差异(P>0.05)。2.5mg/L锶浓度上调小鼠心脏Mn-SOD及GSH-Px1基因m RNA的表达,下调肾脏GSH-Px1基因m RNA的表达(P<0.05);5.0mg/L锶浓度下调小鼠心脏Mn-SOD基因及肾脏GSH-Px基因m RNA的表达(P<0.05)。(4)与PWC组相比:0.5mg/L锶浓度组小鼠心脏NMNAT1和肾脏NAMPT、NMNAT1含量显著增加(P<0.05);2.5mg/L锶浓度组小鼠心脏NMNAT1、肝脏NAMPT及NMNAT1含量显著增加(P<0.05);5.0mg/L锶浓度组小鼠心脏和肝脏NAMPT及NMNAT1含量、肾脏NMNAT1含量均显著增加(P<0.05)。(5)小鼠肝脏中,与PWC组相比:2.5mg/L、5.0mg/L锶浓度组Bax和Cleaved-caspase-3蛋白表达量下调(P<0.05),0.5mg/L、2.5mg/L和5.0mg/L锶浓度组Bcl-2蛋白表达量上调(P<0.05),0.5mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L锶浓度组Caspase蛋白表达量显著下调(P<0.05)。结论:1.水中0.1mg/L、0.2mg/L、和0.4mg/L锶能够延长蚤状溞生存期,其中0.4mg/L锶浓度组蚤状溞生存期最长。2.水中0.1mg/L-0.8mg/L锶浓度干预至蚤状溞7日龄、14日龄、21日龄时可不同程度增强CAT、GSH-Px、SOD酶活性,从而增强其抗氧化能力,降低MDA和H2O2含量,进而可能起到延缓衰老,延长寿命的作用。3.饮水锶可增强小鼠心脏SOD酶、肾脏CAT酶以及肝脏SOD和GSH-Px酶活性,0.5mg/L饮水锶可同时增加肾脏中NAMPT、NMNAT1含量,2.5mg/L饮水锶可同时增加肝脏中NAMPT和NMNAT1含量,5.0mg/L饮水锶可同时增加心脏中NAMPT和NMNAT1含量,从而可能增加相应脏器中NDA+的合成,因而提高小鼠体内抗氧化能力,从而可能减少因ROS积聚对细胞产生的破坏,使Bcl-2/Bax比值保持较高状态,减少Caspase-3的活化,进而降低细胞发生凋亡的概率,延长细胞寿命。4.本研究结果提示锶可能是一种长寿元素,可能通过增强水蚤体内抗氧化水平从而延缓细胞凋亡的发生,进而延长了水蚤的生存期。
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