论文部分内容阅读
大肠杆菌和沙门氏菌是两种主要的食源性致病菌。自从发现抗生素以后,人们主要用抗生素来治疗由细菌感染引发的疾病,然而许多细菌对于抗生素已经产生耐药性。因此,筛选低毒、无抗药性的天然药物作为新型抑菌剂成为研究热点。据文献报道,常用中药大黄和黄芩具有广谱的抑菌作用。但是关于大黄和黄芩对大肠杆菌和沙门氏菌其抑菌作用的主要化合物成分以及对这两种菌的抑菌机理尚不清楚。因此,本研究选取大黄和黄芩两种中药,旨在追踪这两种中药对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌活性物质,并探讨其抑菌机理,为开发新型的抑菌剂提供理论依据。本研究以大肠杆菌和沙门氏菌为研究对象,用无水乙醇提取大黄和黄芩,将所得到的提取液旋转蒸发制备成浸膏,再按照极性从小到大的顺序,先后使用石油醚、氯仿(三氯甲烷)、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,从而得到不同极性部分的活性物质。使用滤纸片法和96孔板微量肉汤稀释法检测所得到的分段萃取物分别对大肠杆菌和沙门氏菌这两种供试菌的抑菌效果,并从中筛选出抑菌效果最好的有机溶剂萃取部分。经试验得出在大黄中,大黄氯仿萃取部分与其他部分相比,对大肠杆菌和沙门氏菌都有较好的抑制作用;在黄芩中,则是黄芩乙酸抑制萃取部与其他萃取部分相比,对这两种供试菌有较好的抑制效果。然后再分别用高效液相色谱和质谱联用技术(UPLC/MS/MS)分析大黄氯仿部分和黄芩乙酸乙酯部分的主要化学成分。通过分析图谱,查阅文献,确定了大黄氯仿萃取部分的主要化合物为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚;确定了黄芩乙酸乙酯萃取部分主要化合物为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素。为了追踪到最具抑菌活性的单体化合物,我们用滤纸片法和96孔板微量肉汤稀释法分别测定大黄氯仿萃取部分的这5种主要化合物对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌作用,结果发现这5种化合物中对这两种菌抑制作用最强的化合物是大黄酸。用相同的方法测定黄芩乙酸乙酯萃取部分的4种主要化合物对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌作用,发现,黄芩素对这两种菌的抑制作用最强。因此,我们选择大黄酸和黄芩素作为研究对象,研究他们对大肠杆菌和沙门氏菌抑制作用的机理,旨在为开发新型的天然抑菌剂提供理论基础。通过观察大黄酸和黄芩素对大肠杆菌和沙门氏菌生长曲线的影响,大黄酸和大黄素对这两种菌和酸泄漏的影响,以及大黄酸和大黄素对这两种菌的电导率的影响,通过电镜扫描实验观察大黄酸和大黄素对这两种菌外观形态的影响我们得出如下结论:大黄酸、黄芩素能够增加大肠杆菌和沙门氏菌的细胞通透性,使细胞内容物泄露,最终导致细菌细胞死亡。