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目的:
分析维生素E与哮喘发病的关系;观察哮喘小鼠喘息发作缓解情况;通过测量气道炎症因子IL-4、IL-13的量来评价γ-VE的作用。
方法:
雄性Balb/c小鼠40只随机平均分成4组(n=10)，分别为哮喘组(Asthma)、γ-维生素E(γ-VE)干预组(VE)、地塞米松对照组(Dex)和生理盐水对照组（control）。随机选取哮喘组、γ-维生素E组、地塞米松对照组小鼠腹腔注射致敏液0.5 mL进行致敏;再将小鼠置于密闭箱内30min，每日给予雾化吸入25g/L的OVA溶液进行激发，共激发1周。对照组用等量生理盐水代替致敏液或OVA进行腹腔注射和雾化吸入。末次激发24h后标本取材，留取血清液、支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。取支气管肺泡灌洗液(BALF) Gimsa染色，显微镜下进行细胞计数细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞。应用ELISA试剂盒检测BALF和血清中IL-13和IL-4含量。肺组织用石蜡包埋后进行HE染色，显微镜下观察肺组织中炎性细胞。免疫组织化学(IHC)检测IL-4和IL-13在肺组织中的表达部位。
结果:
一、各组小鼠激发后哮喘发作情况
哮喘大多在激发后30分钟内发作，哮喘组经OVA激发后小鼠出现精神烦躁、口周发绀、点头呼吸和呼吸困难等表现;γ-VE干预组发作程度有所减轻;地塞米松组发作程度明显减轻;对照组未见异常。
二、小鼠肺泡灌洗液细胞总数及细胞分类
显微镜下各组小鼠BALF进行细胞计数，哮喘组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞数量与对照组相比均明显增加，有统计学意义(P＜0.05);地塞米松组、γ-VE组细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞数量与对照组相比有统计学意义(P＜0.05)，但巨噬细胞计数与对照组相比无统计学意义(P＞0.05);地塞米松组、γ-VE组细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞数量与哮喘组相比，有统计学意义(P＜0.05)。
三、细胞因子检测
γ-VE干预组小鼠血清及肺组织中IL-4、IL-13表达含量分别与正常组和哮喘组相比均有统计学意义(P＜0.05)。
四、血清中IgE水平
γ-VE干预组血清中IgE含量与哮喘组相比有统计学意义(P＜0.05);γ-VE干预组血清中IgE含量与对照组相比无统计学意义(P＞0.05)。
五、小鼠肺组织病理HE染色
哮喘组小鼠气道壁及气道平滑肌明显增厚，支气管周围可见大量炎细胞浸润，主要以嗜酸细胞、淋巴细胞为主;γ-VE干预组小鼠气道壁及气道平滑肌中度增厚，支气管周围可见中量炎细胞浸润;地塞米松组小鼠气道壁及气道平滑肌轻度增厚，支气管周围可见少量炎细胞浸润。
六、IL-4/IL-13免疫组织化学染色
免疫组织化学染色提示γ-VE组中IL-4和IL-13表达于肺间质中。
结论:
1、Balb/c小鼠哮喘模型制作良好;
2、通过口服γ-VE干预哮喘小鼠，可使哮喘小鼠血清及肺组织中的IL-4和IL-13表达含量下降，从而减轻哮喘气道炎性介质的表达，参与哮喘的发病机制;
3、γ-VE对支气管哮喘的治疗有一定的应用前景。