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目的:探究LncRNA H19作为ceRNA通过拮抗let-7d调控靶基因Lin28b mRNA表达,以促进膀胱癌细胞的增殖和转移作用。获得LncRNA H19作为let-7d的调控靶基因及相关信号传导通路的可靠证据,意在阐明LncRNA H19的功能,揭示膀胱癌发生增殖及侵袭转移的新分子机制,为寻找膀胱癌诊断和治疗的靶基因和药物提供进一步的科学依据。研究方法:通过GEO数据库中的芯片数据分析,选取我们要进行研究的目的基因。在2015年7月至2016年7月就诊就中国医科大学附属第一医院泌尿外科,并接受手术治疗的膀胱癌患者组织中抽取35例膀胱癌患者临床标本组织及其相应临近部位的正常组织,通过病理组织认证,同时伴有详细的相关临床病例资料。对于抽取的35对标本进行qRT-PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction)实验验证,确定H19和Lin28b为研究对象;并通过进一步的qRT-PCR实验和统计学计算,推测H19与Lin28b在人膀胱癌组织中表达量的相关性分析。接着我们选取了本实验室现有的4种膀胱癌细胞系及1种正常的膀胱细胞系,测量每种细胞系中H19的表达量。接着通过脂质体Lipo3000转染人工合成的H19Si RNA于膀胱癌细胞T24中,验证3条不同Si RNA中效能最好的一条。通过脂质体Lipo3000转染人工合成的H19 Si RNA,转染至膀胱癌细胞T24内,并以Negative control(NC)作为对照,通过qRT-PCR实验对比两组实验组中H19,Lin28b及Let-7d的表达量,验证H19与Lin28b之间通过Let-7d进行调控的相互关系,以及通过CCK8实验和平板克隆实验验证其对膀胱癌细胞增殖的影响,通过划痕实验和侵袭实验验证其对膀胱癌细胞侵袭的影响。通过生物信息学网站(Target Scan)预测H19和Lin28b与let-7d的结合位点,并通过已发表的相关文献进行了进一步的验证。在体外膀胱癌细胞中,利用qRT-PCR和细胞功能实验验证H19、Lin28b与let-7d的互相调控关系以及对膀胱癌细胞的影响:通过脂质体Lipo3000转染人工合成的H19的Si RNA及Let-7d的inhibitor,转染至膀胱癌细胞5637内,并以只转染了H19 Si RNA的5637膀胱癌细胞作为对照,通过qRT-PCR实验对比两组实验组中H19,Lin28b及Let-7d的表达量,验证H19与Lin28b之间通过Let-7d进行调控的相互关系,以及通过CCK8实验和平板克隆实验验证其对膀胱癌细胞增殖的影响,通过划痕实验和侵袭实验验证其对膀胱癌细胞侵袭的影响。最后通过Western Blot测定H19可以体外细胞水平中调节Lin28b蛋白质及所在通路c-Myc/Lin28b/Hmga2各个蛋白质表达量的变化。结果:通过采集的患者标本进行了qRT-PCR实验,我们发现与癌旁组织或正常膀胱组织相比,H19与Lin28b在mRNA水平上其膀胱癌组织中的表达量明显升高。此外,在膀胱癌细胞中也同样观察到增强的H19及Lin28b的表达,验证了GEO及R2两个数据库中提示H19及Lin28b在膀胱癌中高表达的正确性。接着我们通过统计学分析得出H19与Lin28b在膀胱癌的表达呈正相关性。接着我们通过相向细胞中转染H19 Si RNA筛选出效能最好的Si RNA;并在体外细胞实验中通过qRT-PCR实验从mRNA水平验证了H19能够正向调控Lin28b的表达。此外,利用H19 Si RNA干扰膀胱癌细胞内H19表达对比与NC组的膀胱癌细胞,利用CCK8实验验证降低H19在细胞中的表达可以降低膀胱癌细胞的增殖;利用划痕及transwell实验证明降低H19在膀胱癌细胞中的表达能够降低膀胱细胞的迁移。利用生物信息学预测得到了H19/Lin28b与Let-7d的确切的结合位点,并通过已有的文献验证该位点真实性及作用的可靠性。接着我们在膀胱癌细胞中通过qRT-PCR及细胞功能实验验证三者之间的调控关系:干扰LncRNA H19的表达能够降低靶基因Lin28bmRNA的表达;而当同时加入Let-7d的inhibitor的时候,能够减弱H19与Lin28b的协同表达。细胞功能实验结果显示:当我们在5637中转染Let-7d inhibitor及H19 Si RNA并以只转入H19 Si RNA作为对照时,CCK8细胞增殖实验及平板克隆实验显示膀胱癌细胞的增殖速度明显上升,Transwell实验及划痕实验都显示膀胱癌细胞的侵袭能力明显上升。最后我们通过Western印迹分析进一步发现,H19抑制Lin28b蛋白水平的表达,降低c-Myc/Lin28b/HMGA2蛋白表达,这些影响可能会导致膀胱癌细胞的异常增殖和转移。结论:1)LncRNA H19和Lin28b在膀胱癌组织中高表达且两者表达存在正相关;2)LncRNA H19以ceRNA角色构成H19/Let-7d/Lin28b网络结构,通过与Lin28b-b的mRNA竞争性的结合let-7d来调节Lin28b-b的表达,从而促进膀胱癌细胞的增殖和转移。3)在膀胱癌中H19通过c-Myc/Lin28b/HMGA2信号通路参与调控。cMyc/Lin28b/HMGA2通路可以介导膀胱癌细胞的增殖和转移,且Lin28b是长链非编码RNA H19的作用靶标。