黄瓜抗真菌基因遗传转化体系的研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:summerquaner
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
黄瓜在我国蔬菜周年供应上占有重要地位,但易受多种真菌病害的危害而使产量降低,品质下降。传统的育种方法周期长、耗资大、效率低、受抗性基因资源匮乏的限制、还易出现抗性退化的现象,且黄瓜具有严重的有性杂交不亲和障碍,用这种方法很难得到具有抗性的优良品种。因此,本研究通过基因工程手段,利用农杆菌介导法首次将抗真菌基因(菜豆几丁质酶基因)导入黄瓜,建立了黄瓜高效的植株再生体系和遗传转化体系,探讨了影响植株再生频率和遗传转化效率的主要因素,确立了最佳的植株再生和遗传转化条件,获得了阳性转基因植株。主要研究结果如下: 1 外植体和基因型对器官发生的影响 子叶节是最佳的外植体;最适宜的芽诱导培养基为MS+6-BA1mg/L;基因型对再生频率影响差异极显著,再生频率最高的是“长春密刺”,为93.2%,其次是“叶三旱黄瓜”,为40.1%,“老来少”最低,为10.6%。 2 蔗糖浓度对体细胞胚胎发生的影响 较高的蔗糖浓度有利于胚胎发生。胚性愈伤诱导最适宜的蔗糖浓度为9%;6%的蔗糖有利于胚的形成和萌发。 3 基因型及PGR对体细胞胚胎发生的影响 “叶三旱黄瓜”胚形成率最高,达67.1%,而“长春密刺”及“老来少”几乎无胚的形成。胚诱导培养基中的PGR对胚的形成也有影响,最适宜的PGR配比为NAA0.5mg/L、6-BA0.5mg/L。 4 黄瓜遗传转化的最适宜条件 子叶节预培养1-2天,真空侵染5分钟,在含有6-BA1mg/L、乙酰丁香酮(AS)100μmol/L、pH5.2的MS培养基上进行培养,遗传转化效率最高。最佳的选择压力为卡那霉素30mg/L。 5 转基因植株的检测 分别用两对引物对To代再生植株进行PCR检测,结果“长春密刺”的88株再生植株中,有50株为阳性,占再生植株的56.82%,以起始外植体计算,阳性率为3.84%;“叶三旱黄瓜”14株再生植株中有10株为阳性,占再生植株的71.43%,以起始外植体计算,阳性率为3.09%。PCR检测结果可初步证明目的基因已整合到黄瓜基因组中。
其他文献
为了摸索菏泽牡丹园土壤动物的生态状况及其变动规律,笔者于2001年10月至2002年9月间,采用Tullgren干漏斗法,对菏泽牡丹园土壤动物及其甲螨群落组成、数量分布、季节变化、垂直
癌症是人类所面临的重要健康问题,而癌症的靶向治疗自21世纪初兴起以来快速发展。间变性淋巴瘤激酶(Anaplastic lymphoma kinase,ALK)是酪氨酸蛋白激酶家族中的重要成员,ALK蛋白活性的失调尤其是致癌性ALK融合蛋白的产生与多种癌症的发生密切相关,是治疗非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer cell,NSCLC)的优良靶点。耐药问题是制约ALK抑
学位
株高和分蘖是组成水稻株型的重要农艺性状,和光合效率、抗倒伏等密切相关,是影响水稻产量的重要因素之一。上世纪60年代,矮秆基因的有效应用使水稻产量有了一次质的飞跃,由此
高职教育要主动适应企业对人才培养的需求,努力提高人才培养质量,使毕业生素质与企业的需求相适应。只有这样,才能赢得社会、企业的信任和支持。但现实工作中,企业用人需求与
摘 要: 研究生创新素质的培养,不仅应在专业培养计划内实施,还应通过课程外的各种学术交流活动加以拓展和深化。学术交流是研究生创新素质培养的一条有效途径。本文结合学校实际对学术交流在研究生创新素质培养中的作用、学术交流的实践形式进行了分析,并提出了进一步办好研究生学术交流的对策。  关键词: 民族地区高校 学术交流 创新素质培养 交叉学科  以创新为时代特征的21世纪,多学科
学位
目的:使用腺病毒转染技术,通过在培养的胰岛细胞株过表达TXNIP蛋白及C247S点突变的TXNIP,观察TXNIP过表达是否可以引起正常培养条件下的胰岛细胞发生损伤和凋亡,并通过与C247S位
瓦斯灾害是煤炭行业中危险和制约煤矿安全生产的主要因素。因此,实时的检测瓦斯气体的产生源、泄漏源以及浓度,可以保护环境,保证工矿安全运行及人身安全。本文以矿井瓦斯的主要
该文研究1.运用相关分析,对缙云山常绿阔叶林土壤酶活性与土壤肥力的关系进行了研究.2.采用DCCA(去势典范对应分析)排序轴分类法(OAC).对所调查的群落进行了生境与群落关系的
卵透明带是发展孕前型避孕疫苗的一个理想的靶抗原。然而卵透明带抗原免疫可能引起的卵巢结构与功能的异常是发展卵透明带避孕疫苗的一个障碍。为探讨采用粘膜免疫方法在输卵