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目的：研究Wnt-1诱导分泌蛋白2(WISP-2)基因在人脑星形细胞瘤中的表达情况及其与人脑星形细胞瘤发生、发展的关系。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测47例人脑星形细胞肿瘤、10例正常脑组织中WISP-2的mRNA表达水平,并结合临床资料分析WISP-2表达水平与星形细胞瘤临床指标的相关性关系。结果：RT-PCR检测结果显示正常脑组织中无WISP-2 mRNA表达,在星形细胞瘤中相对表达量为0.677±0.445,与正常组比较差异有显著性(t=4.783,P＜0.01)。高级别组(Ⅲ,Ⅳ)与低级别组(Ⅰ,Ⅱ)WISP-2 mRNA相对表达量分别为0.924±0.438、0.478±0.344,两者比较差异有显著性(t=3.909,P<0.01),Spearman相关性分析显示WISP-2 mRNA表达水平和肿瘤病理级别具有显著性正相关关系(r=0.448,P=0.002)。WISP-2 mRNA的表达与年龄、性别、肿瘤部位无显著性相关关系(均P>0.05),与肿瘤大小有显著性关系(P<0.05)。结论：WISP-2 mRNA在人脑星形细胞瘤中有表达,其表达水平与人脑星形细胞瘤的恶性程度密切相关；提示WISP-2在人脑星形细胞瘤的发生发展过程中发挥重要的调控作用。WISP-2基因有可能作为评价人脑星形细胞瘤恶性程度的指标之一。目的：研究WSIP-2蛋白在人脑星形细胞瘤中的表达情况及其与各临床病理指标的关系。方法：采用免疫组织化学SP法检测54例人脑星形细胞瘤和10例正常脑组织中的WSIP-2蛋白表达,分析其表达水平与患者各临床病理指标之间的关系。结果：免疫组化检测结果显示正常脑组织细胞中无WISP-2蛋白阳性表达(0／10)。WISP-2蛋白在星形细胞瘤组织内呈阳性表达,阳性率为64.8%(35／54),与正常脑组织中表达比较有显著性意义(P<0.05)。高级别组(Ⅲ,Ⅳ)与低级别组(Ⅰ,Ⅱ>中WISP-2蛋白表达阳性率分别为80.8%(21／26)、50.0%(14／28)，两者比较差异有显著性(P<0.05)。WISP-2蛋白的表达与年龄、性别、肿瘤部位无显著性关系(均P>0.05),与肿瘤大小有显著关系(P<0.05)。通过Spearman相关分析表明,WISP-2蛋白表达水平随着肿瘤的级别升高而增高(r=0.370,P=0.006),两者呈正相关性关系。结论：WSIP-2蛋白在人脑星形细胞瘤中高表达,与人脑星形细胞瘤的病理分级有正相关性,有可能作为星形细胞瘤恶性程度的指标。目的：构建沉默人WISP-2基因表达的siRNA序列并筛选出有效siRNA序列,为体外研究WISP-2的生物学功能提供材料。方法：通过RT-PCR检测WISP-2 mRNA在U251细胞株的表达,设计5个靶向WISP-2的RNA干扰序列的小干扰RNA,通过脂质体转染U251细胞,RT-PCR及Western blot筛选有效干扰序列,荧光倒置显微镜观察转染效果,最终得到人WISP-2基因沉默的U251细胞株。结果：WISP-2 mRNA在U251细胞株中表达,组5(WISP-2-289 siRNA)沉默WISP-2表达后,RT-PCR及Western blot方法检测到WISP-2 mRNA和蛋白表达水平分别为0.113±0.111, (19.03±1.44)%,与其组1(空白对照组)、组2(阴性对照组)、组3(WISP-2-639 siRNA)、组4(WISP-2-307 siRNA)比较,差异有显著性意义(P<0.05)。荧光倒置显微镜观察转染效率为(87.03±11.56)%。结论：筛选出合适的WISP-2 siRNA干扰序列,为进一步体外研究WISP-2基因在U251细胞株中的作用提供基础.。目的：探讨siRNA沉默WISP-2基因表达对U251细胞生物学特性的影响,以明确其在星形细胞瘤肿瘤形成过程中可能的作用及机制。方法：实验分3组：空白对照组(未作任何干扰的U251细胞株)；阴性对照组(加入非特异性siRNA/Lipofectamine复合物的U251细胞株)；siRNA干扰组(为WISP-2-siRNA-289-脂质体转染的U251细胞株)。通过MTT法、ranswell法、流式细胞仪PI染色法检测人WISP-2基因表达对U251细胞的增殖、迁移、凋亡能力的影响,并检测Bcl-2、Bax蛋白在细胞凋亡过程中的表达。结果：MTT检测发现在相同的时间点,siRNA干扰组组的OD值明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)；检测迁移能力实验中siRNA干扰组肿瘤细胞的运动迁移能力明显下降,穿过聚碳酸酯膜的细胞数量较对照组明显下降,与对照组相比有明显区别(P<0.05)；培养48h进行流式细胞仪检测可见,siRNA干扰组平均凋亡率为(16.59±1.40)%,空白组平均凋亡率为(3.13±0.34)%,阴性组平均凋亡率为(3.42±0.48)%,siRNA干扰组与阴性对照组、空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。在检测增殖、迁移、凋亡实验中,阴性对照组和空白对照组无明显差异(P>0.05)。siRNA干扰组WISP-2蛋白表达水平为(18.67±1.40)%明显低于空白对照组(70.18±1.82)%和阴性对照组(69.41±1.77)%,且差异有统计学意义(P<0.01),两对照组WISP-2蛋白表达水平比较差异无显著意义(P＞0.05),siRNA干扰组Bcl-2蛋白表达水平为(29.67±1.47)%,明显低于空白对照组(49.51±1.71)%和阴性对照组(49.07±1.35)%,且差异有统计学意义(P<0.01),两对照组Bcl-2蛋白表达水平比较差异无显著意义(P＞0.05)。siRNA干扰组Bax蛋白表达水平为(31.62±1.32)%,明显低于空白对照组(23.98±1.47)%和阴性对照组(24.06±1.55)%,且差异有统计学意义(P<0.01),两对照组Bax蛋白水平比较差异无显著意义(P＞0.05)。Spearman相关性分析显示,siRNA沉默WISP-2表达后,WISP-2蛋白的表达与Bcl-2蛋白的表达具有正相关性(r=0.995,P<0.05),即前者表达越低,后者表达也越低；siRNA沉默WISP-2表达后,WISP-2蛋白的表达与Bax蛋白的表达具有负相关性(r=-0.944,P<0.05),即前者表达越低,后者表达越高。结论：在U251细胞中,siRNA沉默WISP-2基因表达后,可抑制U251细胞的增殖、侵袭能力,增加U251细胞凋亡。并提示通过抑制WISP-2蛋白表达后,下调Bcl-2/Bax蛋白表达的比值来诱导U251细胞凋亡。目的：探讨联合应用WISP-2 siRNA和足叶乙甙(VP16)对U251细胞药物敏感性的影响并探讨其作用机制。方法：应用转染试齐LipofectaminTM2000将WISP-2 siRNA转入U251细胞,同时加入VP16联合培养,48h后予MTT法检测U251细胞增殖、流式细胞仪检测U251细胞凋亡变化。结果：足叶乙甙(VP16)在浓度为1μg/mL就可以表现出对U251细胞的抑制作用,U251细胞随着药物作用时间的延长和药物浓度的增加而明显抑制,具有明显的量效和时效依赖性。MTT法显示空白对照组、阴性对照组、siRNA干扰组、VP16组和siRNA干扰+VP16组OD值分别为0.257±0.011、0.252±0.015、0.166±0.011、0.155±0.012、0.076±0.014,siRNA干扰组和VP16组细胞生长速度较空白对照组和阴性对照组显著降低(P<0.05),siRNA干扰+VP16组生长速度较siRNA干扰组和VP16组显著降低(P<0.05),空白对照组与阴性对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。联合应用WISP-2 siRNA和足叶乙甙(VP16)能明显降低U251细胞增殖能力,WISP-2基因沉默能增加U251细胞对VP16增殖抑制的敏感性。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示空白组平均凋亡率为(3.06±0.39)%,阴性组平均凋亡率为(3.28±0.57)%,siRNA干扰组平均凋亡率为(15.72±1.55)%,VP16干预组平均凋亡率为(14.76±1.41)%,siRNA干扰+VP16组平均凋亡率为(33.09±2.13)%,统计分析结果显示siRNA干扰组和VP16组与阴性对照组、空白对照组比较凋亡增加,差异有统计学意义(P<0.01),siRNA干扰+VP16组细胞凋亡率较siRNA干扰组和VP16组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P=0.848)。结论：联合WISP-2 siRNA和足叶乙甙(VP16)通过抑制U251细胞增殖、促进凋亡,增加U251细胞对VP16敏感性。