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目的1.了解HBsAg阳性孕妇胎盘组织HBV感染和HBV宫内感染情况；2.了解Toll样受体3(TLR3)、核转录因子(NF-κB p65)在正常孕妇、HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织中的基因表达水平和蛋白分布情况；3.了解TLR3、 NF-κB P65与孕妇HBV感染及HBV宫内感染的关系；4.初步探讨TLR3、 NF-κBp65、 IFN-β在胎盘抵御HBV感染及HBV宫内感染中的作用。方法选择2010年7月至2011年11月在泰安市中心医院产科进行产检并且分娩的外周血HBsAg阳性孕妇68例为研究组，同期选择于本院产科进行产检并分娩的正常孕妇30例为正常对照组，两组孕妇肝功能正常。根据孕妇知情同意原则，在孕妇分娩前采集肘静脉血，分娩时采集脐血，同时无菌收集分娩时胎盘组织，进行下述研究：1.采用双抗体夹心酶链免疫吸附法(ELISA)检测母血和脐血中HBsAg、HBeAg及母血中IFN-β，荧光定量PCR法检测HBVDNA含量；2.采用免疫组化法检测HBsAg阳性孕妇胎盘组织中HBsAg的分布及正常孕妇和HBsAg阳性孕妇胎盘TLR3、NF-κBp65的蛋白分布及表达情况；3.采用RT-PCR检测正常孕妇和HBsAg阳性孕妇胎盘TLR3mRNA、NF-κB p65mRNA的表达情况。结果1.68例HBsAg阳性孕妇所生新生儿，11例脐血中HBsAg阳性，16例HBVDNA阳性，任意一项阳性者20例，即宫内感染组20例，宫内未感染组48例，合计宫内感染率29.41%(20/68)，母亲HBsAg、HBeAg双阳性者共38例，其宫内感染率36.84%(14/38)；2.母血HBVDNA阳性与HBVDNA阴性进行宫内感染率比较，差异有统计学意义(χ~2=24.178， P<0.001)；3.免疫组化检测68例HBsAg阳性孕妇足月分娩胎盘组织HBsAg，其中33例阳性，阳性率为48.53%(33/68)。蜕膜细胞(DC)感染率为48.53%(33/68)，滋养层细胞(TC)感染率为42.65%(29/68)，绒毛间质细胞(VMC)感染率为30.88%(21/68)，绒毛毛细血管内皮细胞(VCEC)感染率为13.24%(9/68)，在胎盘各型细胞中HBsAg的表达差异有统计学意义，行×列表卡方检验(χ~2=26.314，P<0.001)。胎盘的各型细胞中均有棕黄色阳性信号分布，且从胎儿的母体面到胎儿面HBsAg阳性信号呈逐渐下降趋势，大多分布于胞浆，偶见分布于胞核；4.免疫组化结果显示：30例正常孕妇的胎盘组织中均有TLR3蛋白的表达，且TLR3蛋白在胎盘的各型细胞中均有表达，68例HBsAg阳性孕妇中56例胎盘组织中有TLR3表达，阳性率为82.35%(56/68)，TLR3在正常孕妇胎盘各型细胞及HBsAg阳性孕妇胎盘组织各型细胞中分布差异均有统计学意义(DC：χ~2=31.099，P<0.001，TC： χ~2=21.950，P<0.001, VMC：χ~2=11.086，P<0.001, VCEC：χ~2=9.728，P<0.001)，HBV宫内感染组TLR3的阳性率明显低于宫内未感染组，差异有统计学意义，(χ~2=11.848，P<0.001)，所有HBsAg阳性组和正常对照组胎盘组织中均检测到NF-κBp65蛋白的表达，NF-κBp65主要表达于胎盘组织滋养细胞、血管内皮细胞浆及少量胞核中；5.HBsAg阳性组胎盘组织中TLR3、NF-κBp65蛋白染色的平均光密度值均较正常对照组明显减弱，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.05)，HBV宫内感染组TLR3蛋白的平均光密度值低于HBV宫内未感染组和正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05，P=0.005)，而宫内未感染组与正常对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05), HBV宫内感染组和HBV宫内未感染组的NF-κBp65蛋白的平均光密度值明显低于正常对照组，差异有统计学意义，(P＜0.001,P＜0.001),宫内感染组低于宫内未感染组，差异有统计学意义(P＜0.001),母血HBeAg阳性的胎盘TLR3、NF-κBp65蛋白平均光密度值明显低于HBeAg阴性组，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.05)；6.RT-PCR结果显示：正常对照组胎盘组织TLR3mRNA、NF-κBp65mRNA的含量明显高于HBsAg阳性孕妇，差异有统计学意义(P<0.001；P<0.05)，其中宫内感染组TLR3mRNA、NF-κBp65mRNA表达低于宫内未感染组和对照组，差异有统计学意义(P<0.001，P＜0.001；P<0.05，P<0.05)，宫内未感染组TLR3mRNA表达低于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)，宫内未感染组NF-κBp65mRNA表达与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05)，TLR3mRNA、 NF-κBp65mRNA在母血HBVDNA阳性组表达低于HBVDNA阴性组，差异均无统计学意义(P>0.05，P>0.05)；7.宫内感染组孕妇外周血IFN-β水平低于宫内未感染组和对照组，差异有统计学意义(P<0.001，P＜0.001)，宫内未感染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)；8.胎盘TLR3mRNA与孕妇外周血IFN-β呈正相关关系(r=0.732，P<0.01)，胎盘NF-κBp65mRNA亦与孕妇外周血IFN-β呈正相关关系(r=0.876，P<0.01)，胎盘TLR3mRNA与NF-κBp65mRNA呈正相关关系(r=0.698,P<0.01)。结论1.本次研究母亲HBsAg阳性宫内感染率为29.41%，母亲HBsAg、HBeAg双阳性的新生儿宫内感染率为36.84%；2.HBeAg阳性、 HBVDNA阳性是HBV宫内感染的危险因素。 HBeAg、HBVDNA可能通过下调TLR3、NF-κBp65的表达，导致HBV宫内感染率的升高；3.HBV可感染胎盘组织的各型细胞，且从母体面到胎儿面呈逐渐下降趋势，胎盘屏障在阻断HBV宫内感染中发挥了一定的作用；4.TLR3蛋白分布于胎盘组织的各型细胞的胞浆中，从母体面到胎儿面TLR3蛋白的表达呈逐渐上升的趋势， NF-κBp65蛋白主要表达于胎盘的滋养细胞、血管内皮细胞胞浆及少量胞核；5.孕妇胎盘组织中TLR3、 NF-κBp65及外周血IFN-β水平与孕妇HBV感染呈负相关，TLR3、NF-κBp65、IFN-β是孕妇HBV感染的保护因素，也是HBV宫内感染的保护因素；6.胎盘组织中TLR3、 NF-κBp65及外周血IFN-β的表达下降，导致机体抵御病毒的功能减弱，三者水平的下降可能在整个级联反应中导致的乙肝病毒宫内感染的发生。