【摘 要】
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目的:胃癌（gastric carcinoma,GC）是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一,我国胃癌发病率和死亡率在36种癌症类型中均居第三位。目前主要采用手术结合放化疗,依据病人具体情况定制个体化治疗,但由于大多数患者发现时已是晚期,胃癌的预后并未得到实质性的改善。现有研究表明,胃癌的发生发展是及其复杂,由多基因、多因素、多步骤参与,需从分子及基因水平进一步探索胃癌的发生发展机制,以期提供新的治疗生
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目的:胃癌（gastric carcinoma,GC）是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一,我国胃癌发病率和死亡率在36种癌症类型中均居第三位。目前主要采用手术结合放化疗,依据病人具体情况定制个体化治疗,但由于大多数患者发现时已是晚期,胃癌的预后并未得到实质性的改善。现有研究表明,胃癌的发生发展是及其复杂,由多基因、多因素、多步骤参与,需从分子及基因水平进一步探索胃癌的发生发展机制,以期提供新的治疗生物标记物和靶标。真核翻译起始因子6（Eukaryotic translation initiation factor 6,eIF6）是真核翻译因子家族中的一员,在翻译起始过程中具有抗结合特性,能阻止60S核糖体亚基与40S核糖体亚基过早结合,并参与核糖体生成过程。近年来研究表明,eIF6在多种恶性肿瘤中过表达,很可能是一种促癌基因,但eIF6在胃癌中的作用和机制尚不清楚。本实验旨在初步探讨在胃癌组织和胃癌细胞中eIF6的作用和功能,进而为胃癌的发生发展提供新的理论依据。方法:1.采用免疫组织化学技术检测eIF6在人胃癌组织芯片HStm A180Su08～M～047中的表达情况。结合病史资料,分析eIF6在癌组织中的表达与各组临床病理参数之间的关系。2.利用RT-q PCR、Western Blot实验从HGC27,SGC7901,AGS,MGC803,BGC823五株细胞株中筛选出eIF6 m RNA水平及蛋白表达均较高的细胞株AGS和MGC803。3.利用RT-q PCR和Western Blot方法从三条eIF6基因si RNA片段中筛选出干扰效率高的si RNA-2和si RNA-3。4.利用si RNA转染技术建立沉默eIF6的胃癌细胞株AGS和MGC803。利用CCK8实验、平板克隆实验、划痕实验、Transwell侵袭实验检测沉默eIF6对胃癌细胞AGS及MGC803包括体外增殖能力、集落克隆能力、迁移能力及侵袭能力在内的生物学行为的影响。5.利用流式细胞仪检测沉默eIF6对胃癌细胞株AGS和MGC803细胞周期的影响,Western blot实验检测沉默eIF6对胃癌细胞株AGS和MGC803细胞周期蛋白B1（Cyclin B1）表达水平的影响。结果:1.免疫组织化学技术检测分析结果显示:eIF6蛋白在癌组织的表达强度高于癌旁组织（P<0.001）,证实eIF6蛋白在胃癌组织中表达上调。eIF6表达水平仅与p TNM分期有统计学相关性（P=0.007）,与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移及有无远处转移无统计学相关性（P>0.05）。2.CCK8实验检测结果显示:沉默eIF6后,检测24h、48h、72h、96h四个时间点各组细胞的OD值。沉默组AGS/MGC803细胞OD值较对照组明显降低,提示沉默eIF6基因能够降低胃癌细胞体外增殖能力。3.平板克隆实验结果显示:沉默eIF6后AGS/MGC803细胞株细胞集落形成数目较对照组明显减少,提示沉默eIF6基因可以降低胃癌细胞集落形成能力。4.划痕实验结果显示:沉默eIF6后AGS/MGC803细胞株较对照组24h、48h的迁移率降低,提示沉默eIF6可以降低胃癌细胞的体外迁移能力。5.Transwell实验结果显示:沉默eIF6基因后的AGS/MGC803细胞株穿过小室的细胞较对照组明显减少（P<0.05）,提示沉默eIF6可以降低胃癌细胞的体外侵袭能力。6.流式细胞仪检测沉默eIF6后AGS/MGC803细胞株结果显示:沉默eIF6将胃癌细胞AGS/MGC803细胞周期阻滞在G2/M期,Western blot实验检测此时细胞中周期蛋白Cyclin B1水平,发现其表达下降,提示沉默eIF6可通过将AGS/MGC803细胞阻滞在G2/M期来抑制细胞分裂从而降低其增殖能力。结论:1.eIF6在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织,其表达水平与p TNM分期有关,与其它临床病理参数无关。2.沉默eIF6基因能抑制胃癌细胞株AGS及MGC803体外增殖、迁移及侵袭的能力,推测eIF6基因在胃癌发挥促癌作用。3.沉默eIF6基因能将胃癌细胞株AGS及MGC803细胞周期阻滞在G2/M期,周期蛋白Cyclin B1的表达水平下降。
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目的:急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）是儿童最常见的恶性肿瘤。儿童ALL的无事件生存率（event free survival,EFS）达到81%,但仍有15%-20%的复发率,且一旦复发,治愈率不足40%。糖皮质激素（Glucocorticoids,GCs）耐药是ALL复发的主要原因之一。Micro RNAs（MiRNA）是约22个核苷酸的小
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