锌指蛋白是真核生物中最常见的转录因子,约有1/3的锌指蛋白在N端含有KRAB转录抑制结构域。KRAB型锌指蛋白为四肢脊椎动物所特有,并随着物种进化,数目急剧增加。这说明KRAB锌指蛋白在物种进化及发育过程中具有重要的生物学功能,然而,目前对这类蛋白的功能还知之甚少。ZNF268是本实验室发现的一个典型的KRAB型锌指蛋白,已有文献报道ZNF268与胚胎发育、血细胞分化及白血病的发生相关,但ZNF268具体的功能目前仍不清楚。为了进一步研究ZNF268的生物学功能,我们调查了ZNF268在人不同正常及癌变组织中的表达。结果表明,ZNF268可能作为一种多功能分子,在不同类型的组织中发挥着不同的功能；同时也提示ZNF268的异常表达与癌症发生密切相关。在人宫颈组织中,ZNF268总蛋白(ZNF268a/ZNF268b2)在宫颈鳞癌中的表达明显高于正常宫颈鳞状上皮细胞中的表达,并且ZNF268b2的表达量在宫颈癌组织中高于ZNF268a,提示ZNF268b2可能影响宫颈癌症的发生。为了探讨ZNF268在宫颈癌发生过程中的功能,利用RNA干扰技术下调ZNF268在宫颈癌细胞系HeLa中的表达。结果显示,下调HeLa细胞中ZNF268的表达,不仅抑制了HeLa细胞的增殖和在软琼脂中的克隆形成,同时也抑制了其在裸鼠皮下的成瘤能力。并且,ZNF268下调阻滞HeLa细胞周期从G1期向S期运行和促进TNFa诱导的细胞凋亡。以上结果表明,ZNF268在宫颈癌组织中高表达,可能会促进癌细胞的增殖,与癌症的发生发展密切相关。NF-κB信号通路与许多癌症发生相关。本研究发现,NF-κB通路在ZNF268高表达的宫颈癌组织中呈激活状态。提示在宫颈癌发生过程中ZNF268可能参与调节NF-κB通路的活性。进一步研究证实,ZNF268b2通过与NF-κB通路中的关键激酶IKK相互作用促进TNFa诱导的NF-κB通路活性。ZNF268下调不仅抑制了HeLa细胞在裸鼠皮下形成肿瘤的能力,同时也抑制其NF-κB通路活性。并且当ZNF268下调对NF-κB通路的活性抑制由过表达p65回复时,ZNF268下调对HeLa细胞的增殖和凋亡的影响也随之减弱。以上结果表明ZNF268是通过NF-κB通路来发挥其功能。ZNF268编码ZNF268a和ZNF268b2两个蛋白。其中,ZNF268a含有KRAB结构域和锌指结构域,而ZNF268b2仅含锌指结构域。我们进一步对ZNF268a和ZNF268b2在细胞中的分布进行了定位。结果显示,ZNF268a定位于细胞核,而ZNF268b2则分布于整个细胞。一般认为KRAB的功能主要是转录抑制作用,其核定位功能至今尚未报道。为了证实其核定位作用,我们对8种锌指蛋白的KRAB核定位功能分别进行了验证。结果表明,KRAB具有普遍核定位作用,ABox为特异功能区,与B Box相互作用,显著增强KRAB的核定位能力。并且我们发现对KRAB核定位功能具有重要作用的关键氨基酸残基(Va19、Val11、 Phe13、Glu16、Glu17、Trp18、Leu40和Lys49)大部分位于A Box,这更加证实A Box具有特异性核定位功能。进一步研究发现,KRAB的核定位功能是与共转录抑制因子KAP1的相互作用来完成。综上所述,ZNF268在人宫颈癌和HeLa细胞中高表达,下调ZNF268的表达,抑制HeLa细胞的增殖和其在裸鼠皮下的成瘤率,这一功能是通过NF-κB通路来完成。这提示ZNF268与宫颈癌的发生发展密切相关并且可以作为治疗宫颈癌的一个潜在靶标。另外,我们首次发现了KRAB核定位新功能,这不仅为KRAB型锌指蛋白的入核提供了一个新的分子机制,而且为深入研究这类蛋白的生物学功能提供了新线索。