胃癌是常见的癌症类型之一,发病率与死亡率在所有癌症类型中均居高位,胃腺癌是最常见的胃癌病理类型。半数以上的胃癌患者在初诊或手术切除时发生淋巴结转移,这与胃癌患者的不良预后显著相关。本研究以胃腺癌淋巴结转移为主要研究对象,收集未发生淋巴结转移的胃腺癌原发灶肿瘤组织11例,发生淋巴结转移的原发灶肿瘤组织12例,及其对应的癌旁组织各11例。利用基于质谱技术的蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学,整合公共数据库中的胃腺癌转录组测序数据,本研究探究了胃腺癌发生发展过程的预后生物标志物及显著变化的信号通路,以及胃腺癌淋巴结转移相关的分子标志物,为胃腺癌的诊断和治疗提供新思路。本研究基于第八版胃癌cTNM临床分期将所有样本分为6组,将蛋白组与磷酸组表达谱分别基于时间序列分析揭示参与调控胃腺癌发生发展过程的信号通路,结合生存分析筛选与胃腺癌发生和进展相关的预后生物标志物。另外,本研究以发生淋巴结转移的胃腺癌原发灶肿瘤组织为实验组,未发生淋巴结转移为对照组,探索了胃腺癌淋巴结转移相关的蛋白质与磷酸化修饰位点表达谱差异。相比未发生转移组,发生淋巴结转移的临床样本蛋白质组分析中共鉴定到218个显著上调蛋白,49个显著下调蛋白,通过生物通路富集分析发现粘着斑通路和细胞外基质重塑在胃腺癌淋巴结转移过程发挥重要作用。细胞外基质蛋白TNXB与SPON1在淋巴结转移组显著上调,结合胃腺癌转录组数据及病人随访信息,发现TNXB与SPON1的高表达均与病人不良预后相关,且TNXB和SPON1共同高表达与患者的不良预后相关性更高。经生物学实验验证靶向TNXB抑制胃癌细胞迁移,通过蛋白互作网络分析和转录水平共表达分析初步探索了TNXB的下游调控底物。发生淋巴结转移的临床样本磷酸化蛋白质组分析鉴定到118个显著上调的磷酸化修饰位点,79个显著下调位点,显著上调的磷酸化蛋白富集于粘着斑通路和癌症蛋白聚糖通路。通过生物信息学方法预测到12个参与调控的上游激酶可能在淋巴结转移组异常活化,3个上游激酶可能异常失活,为胃腺癌淋巴结转移过程的分子机制探索提供了新方向。本研究基于胃腺癌临床组织样本的蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学,筛选了与胃腺癌发生发展相关的预后生物标志物,以及与胃腺癌淋巴结转移相关的异常生物信号通路、预后生物标志物和活性异常的激酶。研究结果为胃腺癌淋巴结转移的研究提供了坚实可靠的蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学数据,为胃腺癌的诊断和药物开发提供了潜在靶点。