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目的:系统性研究蒙药土木香的化学成分,对其进行正常小鼠脾淋巴细胞增殖活性的测定,同时快速分析鉴定体内外倍半萜内酯类化合物,并探讨其裂解规律。 方法及结果:(1)采用RP-HPLC色谱法、硝酸银硅胶柱色谱及薄层色谱法对土木香乙酸乙酯提取物进行分离制备,根据其理化性质及波谱技术(1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、NOESY、HRMS)对化合物进行结构鉴定,从中分离并鉴定了22个单体化合物,包括3个新化合物:4β,5-dihydroxy-eudesma-11(13)-dien-12,8β-olide(1)、5,6α-dihydroxy-eudesma-11(13)-dien-12,8β-olide(2)、1(10),4(5),11(13)-germacra-trien-12,8β-olide(3),11个土木香中首分化合物:septuplinolide(9)、1α-hydroxy-eudesma-4(5),11(13)-dien-12,8α-olide(10)、1α-hydroxy-eudesma-3(4),11(13)-dien-12,8β-olide(11)、racemosalactoneA(12)、3-oxo-eudesma-4(11)-dien-12,8β-olide(13)、telekin(14)、4α,15-epoxy-isoalantolactone(17)、1(2),4(15),11(3)-eudesma-trien-12,8β-olide(19)、亚麻酸(20)、亚油酸(21)、油酸(22),8个已知化合物:土木香内酯(4)、异土木香内酯(5)、11,13-二氢土木香内酯(6)、Alloalantolactone(7)、4α,5β-环氧-1(10),11(13)-吉玛烷-12,8α-交酯(8)、igalane(15)、Macrophyllilactone E(16)、11,13-dihydroxy-alantolactone(18)。(2)采用CCK-8法对主成分土木香内酯和异土木香内酯的不同浓度进行正常小鼠脾淋巴细胞增殖活性的测定,同时设ConA为阳性药物对照组和不加药物的阴性对照,与阳性和阴性对照比较,结果土木香内酯和异土木香内酯在高浓度(200μg/mL)和低浓度(20μg/mL)时,OD值均无增加,表明二者对正常小鼠脾淋巴细胞均无增殖活性。(3)采用UPLC-Q-Exactive/MS联用技术,Agilent Zorbax300 Extend C18(2.1×150mm,3.5μm)色谱柱,以乙腈(A)–0.1%甲酸水(B)为流动相梯度洗脱,电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式下检测土木香体内外倍半萜内酯类化合物。通过对照品和参考文献数据,体外鉴定了30个倍半萜内酯类化合物,含有6组同分异构体:C15H18O2、C15H20O2、C15H22O2、C15H20O3、C15H22O3和C15H22O4,并总结其裂解规律,体内血清样品中鉴定了12个血中移行成分。 结论:本实验采用RP-HPLC结合硝酸银硅胶柱色谱法成功的对土木香化学成分进行了研究,并对土木香内酯和异土木香内酯进行了免疫调节活性测定。采用Q-Exactive-MS对土木香体内外成分建立了快速、高效、简便的定性鉴别法,本研究为土木香化学成分提供了结构信息,为其质量控制、血清药化、复方制剂及配伍规律研究提供坚实的理论依据。