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目的在前期实验基础上利用药物阻断剂、免疫荧光染色、TaqManQPCR、激光共聚焦等技术进一步研究肠道病毒71型入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的机制,尤其是网格蛋白依赖型内吞途径在EV71进入人SK-N-SH细胞中作用。材料和方法EV71病毒和所有的细胞株来源于重庆医科大学附属儿童医院儿研所组织库,均为前期实验研究所保存。实验分组一:(1)氯丙嗪(CPZ)处理组(10、20 u M CPZ)(2)制霉菌素(NT)处理组(10、20 ug/ml NT)(3)未处理组(无任何药物)。每组含3个平行孔,并重复3次。SK-N-SH细胞按上述实验分组给予不同的处理条件后,再进行EV71感染实验,最后利用TaqManQPCR和免疫荧光染色法检测靶细胞中EV71mRNA和VP1蛋白表达水平的变化。实验分组二:(1)CPZ处理组(10、20 uM CPZ)(2)未处理组(无任何药物)。每组含3个平行孔,并重复3次。SK-N-SH细胞按上述实验分组给予不同的处理条件后,再进行EV71感染实验,最后利用激光共聚焦显微镜术检测EV71与入侵途径标志分子共定位。结果1、TaqManQPCR结果显示CPZ能够抑制EV71 mRNA的表达(p<0.05),而制霉菌素对其影响无意义(p>0.05)。2、免疫荧光染色结果显示CPZ能够抑制EV71 VP1蛋白的表达(p<0.05),而制霉菌素对其影响无意义(p>0.05)。3、激光共聚焦显微镜术检测结果显示EV71与网格蛋白共定位。结论在前期研究的基础上再次证明EV71是通过网格蛋白依赖性内吞途径入侵SK-N-SH细胞。