牛精原干细胞制备和体外培养的研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:hanhan069
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实验采用三种方法对新生牛睾丸精原细胞进行了体外培养,对其形态学及组织学结构进行观察,即①取10-20mg的睾丸组织块,在10%血清培养液中体外培养1周和2周,并以鲜睾丸组织为对照组,用光学组织学和电镜组织学方法观察和比较睾丸组织及细胞结构;②将剪碎的睾丸组织反复吹打,使曲细精管断裂成小段,然后用10%血清培养液进行培养,用以观察该方法中体细胞和精原细胞的生长行为,把经培养后铺层的细胞固定制片,用电子显微镜观察细胞结构变化;③用2.5%血清的培养液对精原细胞悬液进行长期培养,用来与曲细精管段法进行对比,同时研究长期培养对精原细胞的影响;实验采用含0%、2.5%、5%和10%血清的培养液对精原细胞进行培养,观察血清浓度对精原细胞和支持细胞生长的影响。研究结果表明:新生牛睾丸组织块经体外培养1周,管腔直径明显增大,管壁细胞数增多,曲细精管管腔由实心变为空心。体外培养2周,管腔直径继续增大,管壁细胞数无明显变化。睾丸体细胞的增殖速率随着培养液中血清浓度升高而增加,无血清组中体细胞呈负增长。0%、2.5%、5%和10%四组中,2.5%血清有利于精原细胞生长并形成较多的集落,同时有利于维持精原细胞的未分化状态。曲细精管段培养法、精原细胞悬液培养法和不同血清浓度培养法均获得了典型的精原细胞集落,其中曲细精管段培养法获得的精原细胞集落数量较多,体积较大。新生牛睾丸中存在大小不同的两类精原细胞,经过1周的培养,位于管腔中的精原细胞有些迁移至基膜上。新生牛睾丸曲细精管基膜呈多板层状结构,厚度1.27±0.11μm,这种结构经过体外培养未发生变化。
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