目的观察神经碎片联合层粘连蛋白诱导周围神经缺损修复的作用,为临床遇到的周围神经缺损的病人找到一种切实方便可行的治疗方法。材料与方法1.聚乳酸聚羟基乙酸(PLGA)复合导管的制备取一定量分子量约为10万的聚合物溶于氯仿中,配成10%的溶液,待聚合物完全溶解后,加入一定量经研磨过筛的氯化钠,充分搅拌混匀后,浇注于模具中,浇注后静置24-48小时,脱模后再静置24-48小时,然后在真空干燥箱中真空干燥24小时,最后将材料置于去离子水中浸泡并不时搅动,每4-6小时换一次水,连续48小时,取出后漓干水,真空干燥24小时。该导管孔隙率为85%,孔径约200-300微米,内径1.8mm,外径3-4mm。该导管由作者与济南岱罡科技生物有限公司联合制作。2.动物实验Wistar大白鼠30只(山东大学动物实验中心提供),体重200g左右,抓阄法随机分为3组,每组10只。盐酸氯胺酮腹腔麻醉后,于大鼠左股后外侧作纵行切口,自肌间隙进入显露坐骨神经约2.5cm,在梨状肌下缘3mm处切取长约6mm的坐骨神经干,任其自然回缩。A组神经碎片组:切取2mm的神经片段,剪去神经外膜,将轴突在手术显微镜下剪碎,取适量填入PLGA导管,在手术显微镜下8/0无创缝合线均匀缝合神经外膜和PLGA管壁,使神经断端在PLGA管内相距10mm。B组神经片段+层粘连蛋白(Laminin LN)组:在A组的基础上,在PLGA管内注入0.1ml层粘连蛋白(10ug/ml);C对照组:将神经两断端剪断后8/0无创缝线原位缝合。缝合皮肤创口,术后分笼饲养。3.检测方法3.1大体观察:术后定期观察伤口情况及大鼠步态变化、溃疡发生及愈合时间及足部变化;观察左后肢肌肉萎缩程度,关节僵直屈伸及展趾反射情况;术后8周和12周显露神经断端,观察实验组导管内再生神经情况;观察PLGA导管与周围组织间的相容性与神经断端吻合情况,导管管壁有无塌陷或扭曲断裂,远近端吻合口有无膨大及神经瘤形成,导管表面有无浅表血供形成,与周围组织有无粘连。3.2检测腓肠肌肌电图、小腿三头肌湿重、再生神经显微组织学切片以及进行图像分析,结果采用SPSS13.0进行单因素方差分析及t检验,P<0.05为有统计学意义。结果1.大体观察:术后2周内各组大鼠实验侧足趾均呈并拢状不能着地行走,并出现不同程度肿胀,无溃疡形成。术后2周大鼠伤口愈合好,缝线脱落。术后8周,神经移植组和神经碎片+LN组试验侧足趾均可着地,腓肠肌出现不同程度萎缩,展趾反射可引出;神经碎片组试验侧足趾仍未能着地,腓肠肌萎缩明显,展趾反射未能引出。术后12周神经移植组和神经碎片+LN组足趾出现拇趾外展,展趾反射较灵敏,腓肠肌出现不同程度恢复;神经碎片组足趾可着地行走,无拇趾外展现象,腓肠肌萎缩较明显,展趾反射未引出。术后8周可见PLGA导管与周围组织粘连疏松,易分离,表面少量毛细血管形成,剖开导管神经碎片组和神经碎片+LN组PLGA管内均有再生神经通过,自体神经移植组可见移植段神经与周围组织轻度粘连,远近端吻合口均无膨大,神经外观接近正常。术后12周PLGA导管已基本降解完毕,神经外膜形成完整,剖开外膜可见神经碎片组内神经纤维较神经碎片+LN组内再生神经直径略细,神经碎片+LN组再生神经排列较规则,无明显增生的纤维组织。自体神经移植组可见移植段神经外观接近正常,远近吻合口无膨大,吻合口与周围组织无粘连,无神经纤维溢出,移植段神经活动度正常。2.检测结果:通过检测8周和12周时腓肠肌肌电图、小腿三头肌湿重、再生神经纤维组织学切片并进行图像分析,结果采用SPSS13.0进行数据处理,行单因素方差分析,分析结果示:神经碎片+LN组神经恢复功能优于神经碎片组P<0.05,自体神经移植组显著优于神经碎片组P<0.05,而与神经碎片+LN组无显著统计学意义P>0.05。结论(1)实验证实PLGA导管具有良好的生物相容性,,生物降解率适当,是一种良好的周围神经组织工程材料。(2)神经碎片能够作为桥接神经导管内的填充物促进周围神经的缺损修复。(3)证实神经碎片+LN组神经恢复效果能够接近或达到自体神经移植水平,为治疗周围神经缺损提供了一种新方法。