小麦-黑麦1RS/6AS易位系分子细胞学鉴定

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普通小麦(Triticum aestivum L.,2n=6x=42,AABBDD)作为三大粮食作物之一,是保障粮食安全的重要基础。遗传多样性是小麦遗传改良的基础。普通小麦的起源和驯化过程导致了遗传瓶颈,而现代育种过程又进一步降低其遗传多样性,因此拓宽小麦的遗传基础是小麦研究的重要课题。远缘杂交是将小麦近缘物种的优良基因导入到小麦中的常用技术手段之一。黑麦(Secale cereale L.,2n=2x=14,RR)含有多种可供遗传改良的性状,如抗病、耐逆等,因而被广泛用来作为小麦遗传改良的材料。小麦-黑麦远缘杂交相比于小麦和其他近缘物种杂交,诱导杂种后代发生的遗传变异更加丰富,是研究远缘杂交遗传效应的优良材料。本研究以人工合成小麦改良品系990和秦岭黑麦杂种自交后代为材料,采用基因组原位杂交和荧光原位杂交技术鉴定染色体组成,筛选新的易位系。同时,采用荧光原位杂交和基因克隆测序技术,检测45S rDNA位点在小麦-黑麦远缘杂交过程中的遗传变化。取得研究结果如下:1.以黑麦基因组DNA为探针,在F7种子HM201-202-1-10根尖细胞中检测到一条小麦-黑麦易位染色体。进一步,采用基因组原位杂交和荧光原位杂交技术对HM201-202-1-10自交结实40粒的F8代种子进行细胞学鉴定,结果表明:染色体数目分布为41~43条;其中11粒种子含有一条易位染色体,4粒种子(HM201-201-1-10-8. HM201-201-1-10-29.HM201-201-1-10-33、HM201-201-1-10-35)含有一对易位染色体;该易位染色体的黑麦片段具pSc119.2和45S rDNA(pTa71)信号,小麦染色体端部具两个pTa535信号,表明该易位染色体为1RS/6AS非部分同源易位染色体。2.以45S rDNA(pTa71)为探针,发现小麦亲本990在1BS次缢痕、6BS次缢痕、5DS端部和黑麦亲本1RS次缢痕有清晰信号。对杂种后代进行分析时,除了以上染色体位置,在3DS染色体臂端部发现一个新的45S rDNA(pTa71)信号。通常情况下,小麦3DS端部不含45S rDNA,表明小麦-黑麦远缘杂交诱导了45S rDNA移动。在已有的报道中,只有两个材料的3DS端部发现了45S rDNA信号,一个是普通小麦Wichita,另一个是普通小麦-簇毛麦6V/6A代换系。我们推测3DS端部可能具有特殊的染色体结构导致其容易接受或形成新的45S rDNA位点。3.选择一株不含黑麦1R,3DS端部含有45S rDNA (pTa71)信号且染色体数为42条的整倍体单株HM201-202-1-10-36和秦岭黑麦为材料,克隆45S rDNA的ITS区序列,结果表明:黑麦亲本的20个ITS序列完全一致,长659bp,38个HM201-202-1-10-36 ITS序列中,没有检测到黑麦亲本的ITS序列,表明3D染色体端部的45S rDNA不是来源于黑麦1RS,而是来源于小麦,但是具体来源于哪条染色体还有待进一步研究。
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