新型核酸检测技术研究开发及其应用

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该论文的目的是研究开发新型核酸检测技术应用于生命科学研究,临床诊断及病毒检测.首先我们利用实时定量技术,设计了新的荧光探针,首次对小鼠细胞中的IL-1β TNF-α IL-1进行精确的定量检测.通过这项技术我们成功对在缺糖缺氧的小鼠星形胶质细胞中的细胞因子的表达进行定量,如IL-1β最高为33.062±8.3拷贝,TNF-α最高为422.895±35.992拷贝,IL-6最高为66.594±20.98拷贝.而在时间性方面,在缺糖缺氧的小鼠星形胶质细胞中,IL-1β及TNF-α的表达比IL-6的出现得早定量技术对于制定治疗脑部中风的情况具有重要作用.除此之外,我们发现在小鼠星形胶质细胞的发育过程中,在发育早期IL-6表达水平较高,并随着时间递减;相反,IL-1β及TNF-α的表达量随着发育过程增加,可能是由于这些细胞因子在不同的情况下发挥不同的功能所致.在第二部分,我们改良了现行的实时定量PCR方法,创立了一种更精确的PCR定量方法.由于SARS的出现,我们把该研究应用到SARS病毒的检测,结果显示,增强型实时定量PCR比现行的标准实时定量PCR至少灵敏100倍.而且,医疗检测人员更容易清楚区分阳性或阴性结果,从而避免由于假阴性导致的严重后果.NASBA是一种基因扩增方法,其机理与PCR不同,主要适用于对RNA的检测.我们以NASBA技术为基础,开发出一种对禽流感及口蹄疫有极高灵敏度和特异性的检测系统.而且通过与联合国食品检测组织/世界兽医协会指定的兽医病毒实验室合作,对该系统进行了一系列测试,印证了其准确性和可靠性.这也是全球第一个针对兽类病毒的基因检测系统.此项发明已经获得专利.该研究充分体现了应用型生物技术开发的重要性.每一项技术均有很高的实用性,对科学发展及社会效益大有裨益.
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