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目的：初步探讨重组人白细胞介素-27（interleukin-27, IL-27）体外对人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）来源的细胞因子诱导的杀伤（cytokine induced killer, CIK）细胞增殖及其对肿瘤细胞杀伤功能影响，并探讨其作用机制。方法：1.无菌条件下抗凝抽取健康志愿者外周血20ml，采用Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，第0天加入IFN-γ（1000U/ml），随后根据加入不同细胞因子剂量随机分为六组进行CIK细胞培养，分别为：A组（IL-2:1000U/ml），B组（IL-2:1000U/ml, IL-27:20ng/ml），C组（IL-2:1000U/ml, IL-27:10ng/ml），D组（IL-2:500U/ml, IL-27:10ng/ml），E组（IL-2:500U/ml, IL-27:20ng/ml），F组（IL-27:20ng/ml）,均种植于抗CD3-抗体（CD3-antibody, CD3-Ab）和纤维连接蛋白（fibronectin, FN）包被的培养瓶中，2-3天视细胞生长情况传代扩增，同时根据上述浓度补加细胞因子IL-2和IL-27。2.倒置相差显微镜下观察各组CIK细胞生长情况及形态学变化。3.通过全自动细胞计数仪计数培养3、5、7、9、11、13天各组CIK细胞数量，分析各组CIK细胞增殖情况。4.通过流式细胞术分别检测培养7、9、11、13天各组CIK细胞CD3+CD56+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞的表达水平。5.通过MTS方法测定各组CIK细胞对淋巴瘤K562细胞杀伤活性。6.通过RT-PCR方法检测各组CIK细胞干扰素-γ（interference-γ,IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor, TNF-α）mRNA的表达水平。结果：1.通过倒置相差显微镜下观察到：各组CIK细胞培养第3-5天，细胞体积变大，部分细胞呈梭形生长，各组CIK细胞未见明显差异。培养第7天左右，A组、B组、C组和D组CIK细胞分布密集，体积变大，部分细胞呈集落样生长；E组和F组CIK细胞与A组相比，细胞数量较少，部分细胞体积变小。培养11天左右，A组、B组、C组和D组CIK细胞数量明显增多，细胞透明度明显增加,多呈集落样悬浮生长；E组和F组CIK细胞与A组相比细胞缩小、变圆，细胞数量明显减少。2.全自动细胞计数仪分别计数培养3、5、7、9、11、13天各组CIK细胞数量，结果显示：A组CIK细胞培养13天达增殖高峰，增殖倍数为（3257.73±91.97），B组、C组、D组、E组和F组CIK细胞培养11天增殖倍数达峰值，分别为（3790.92±64.49，4009.85±43.08，4811.87±23.07，2017.31±35.24和1812.78±29.18）。D组CIK细胞培养11天增殖倍数较正常对照组A组培养13天增殖倍数显著性增高，差异具有统计学意义（P <0.05），与B组、C组、E组和F组CIK细胞培养11天相比，D组CIK细胞增殖可见明显差异（P<0.05）。3.流式细胞术检测结果显示：通过组内比较，A组CIK细胞CD3+CD56+T细胞和CD3+CD8+T细胞培养13天表达率最高，分别为（60.03±1.75）%和（62.71±0.69）%，均具有统计学意义（P<0.05）。CD3+CD4+T细胞培养11天和13天表达率分别为（95.2±1.89）%和（91.6±2.57）%，两者之间无统计学意义（P>0.05），与培养7天及9天相比均具有统计学差异（P<0.05）。B组CIK细胞CD3+CD56+T细胞培养9天表达率为（55.51±0.03）%，培养11天CD3+CD8+T细胞表达率为（74.92±2.47）%，均具有统计学差异（P<0.05）。CD3+CD4+T细胞培养13天表达率为（93.30±1.91）%，与11天比较无统计学差异（P>0.05），与培养7天及9天相比具有统计学差异（P<0.05）。C组CIK细胞CD3+CD56+T细胞培养11天表达率为（56.07±0.83）%，CD3+CD8+T细胞培养13天表达率为（74.43±1.90）%，均具有统计学意义（P<0.05）。CD3+CD4+T细胞培养11天和13天表达率分别为（95.50±1.83）%和（95.50±2.93）%，两者之间不具有统计学差异，与培养7天和9天比较具有统计学差异（P<0.05）。 D组CIK细胞培养11天时CD3+CD56+T细胞和CD3+CD8+T细胞表达率明显较高，分别为（66.57±2.44）%和（81.67±1.97）%，均具有显著性差异（P<0.05），CD3+CD4+T细胞培养11天和13天表达无统计学差异，分别为（97.80±1.44）%和（95.70±1.56）%，与7天和9天相比均具有统计学差异（P<0.05）。通过组间比较发现，D组CIK细胞培养11天CD3+CD56+T细胞表达与正常对照组A组培养13天，B组培养9天及C组培养11天相比均具统计学意义（P<0.05），CD3+CD4+T细胞表达与A组培养11天，B组培养13天及C组培养11天相比均无统计学差异（P>0.05），CD3+CD8+T细胞表达与A组和B组培养11天，C组培养13天相比均具有统计学意义（P<0.05）。4. MTS杀伤实验结果显示，效靶比为10:1、20:1、40:1时，D组CIK细胞培养11天时杀伤率最高，分别为（57.23±5.74）%，（65.27±3.27）%和（76.71±2.21）%，与正常对照组A组CIK细胞培养13天杀伤结果相比均具有统计学意义（P<0.05），与B组和C组CIK细胞培养11天杀伤结果相比具有统计学差异（P<0.05）。5. RT-PCR结果显示，A组、B组、C组和D组CIK细胞培养11天IFN-γ和TNF-α mRNA的表达水平分别为（0.45±0.09，2.77±0.20，2.77±0.16，3.36±0.19）和（0.44±0.08，3.13±0.16，3.09±0.12，3.94±0.73），统计学分析发现B组、C组和D组CIK细胞IFN-γ和TNF-αmRNA的表达水平与正常对照组A组比较均显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05），D组CIK细胞IFN-γ和TNF-α mRNA的表达水平与B组及C组相比具有统计学差异（P<0.05）。结论：1.细胞因子IL-27与IL-2联合应用体外可诱导人外周血单个核细胞来源的CIK细胞的分化成熟，缩短CIK细胞培养时间，最佳培养周期为11天。2.细胞因子IL-27与IL-2联合应用体外可显著提高人外周血单个核细胞来源的CIK细胞增殖能力及对肿瘤细胞的杀伤功能，可能与上调CIK细胞IFN-γ和TNF-α mRNA的表达水平相关。