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目的:在胃癌细胞中加入黄连素后,Hsa-miR-411-3P是显著差异表达的miRNA之一,本研究探索Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞的作用功能,预测Hsa-miR-411-3P的靶基因,并验证Hsa-miR-411-3P对其靶基因的调控作用,从而研究在胃癌细胞中黄连素的作用机制。方法:通过高通量测序的方法,对黄连素处理后的胃癌细胞SGC-7901进行miRNA测序和mRNA测序。分析miRNA测序结果,筛选出差异表达的miRNA:Hsa-miR-411-3P。miRBase、NCBI、UCSC等数据库查找差异表达miRNA的碱基序列、染色体定位、物种保守性等基本信息;miGator v3.0数据库查看Hsa-miR-411-3P在人体中的分布情况;MTT方法检测Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞SGC-7901、AGS增殖的影响;流式细胞术检测Hsa-miR-411-3P对SGC-7901、AGS细胞凋亡、细胞周期的影响;Transwell方法检测Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞SGC-7901、AGS侵袭、迁移的影响。RNAhybrid2.1.2、Miranda3.3a、TargetScan7.0 3种在线工具预测Hsa-miR-411-3P靶基因,与mRNA测序结果联合分析,取交集基因认为是比较可靠的靶基因,然后进行蛋白质-蛋白质相互作用分析、GO分析、KEGG分析、cbioportal网站分析。RT-q PCR检测HsamiR-411-3P靶基因VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1的表达。结果:(1)miRNA测序结果中,Hsa-miR-411-3p在黄连素处理过的胃癌细胞中表达显著上调(差异倍数为256,P<0.05)。(2)过表达Hsa-miR-411-3P可以抑制胃癌细胞SGC-7901、AGS增殖、侵袭、迁移,促进凋亡,使SGC-7901细胞周期阻滞于S期,AGS细胞周期阻滞于G1期。(3)RNAhybrid2.1.2、Miranda3.3 a、TargetScan7.03种在线工具预测结果结合mRNA测序结果分析,得到235个Hsa-miR-411-3P的靶基因。Hsa-miR-411-3P靶基因PPI分析得到5个核心基因:SLC2A3、ATP8B4、PLD1、HGSNAT、AP1M1。Hsa-mi R-411-3P靶基因GO分析结果显示,Hsa-miR-411-3P的235个靶基因分子功能集中在酶结合、蛋白质结合、转移酶活性等(P<0.05);生物学过程集中在代谢过程、细胞组件组装、解剖结构发展、细胞成分生物发生等(P<0.05)。KEGG分析结果中,Hsa-miR-411-3P靶基因KEGG信号通路集中在Insulin信号通路、cAMP信号通路、AMPK信号通路、FOXO信号通路等(P<0.05);Hsa-miR-411-3P靶基因VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1共同参与c AMP信号通路。测序结果中VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1可能与Hsa-miR-411-3P存在负调控关系。cBioportal网站分析结果显示,VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1在胃癌中有较高的突变率,导致其mRNA表达量改变。提示Hsa-miR-411-3P可能引起了其靶基因VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1的基因突变,导致这几个基因的mRNA表达量下调,从而作用cAMP信号通路,影响胃癌的发展进程。(4)RT-qPCR结果显示,在过表达Hsa-miR-411-3P的胃癌细胞SGC-7901、AGS中,VAV3、ROCK2表达量均减少;PLD1在过表达Hsa-miR-411-3P的SGC-7901细胞中表达增加,在过表达Hsa-miR-411-3P的AGS细胞中表达减少;PTCH1在过表达Hsa-miR-411-3P的SGC-7901细胞中表达减少,在过表达Hsa-miR-411-3P的AGS细胞中表达增加;PLD1、PTCH1在SGC-7901细胞、AGS细胞这两种细胞中有不一样的表达,需要选取更多胃癌细胞进行研究。结论:Hsa-miR-411-3P可以下调靶基因VAV3、ROCK2的表达,作用于cAMP信号通路,抑制SGC-7901、AGS细胞增殖、迁移、侵袭,促进SGC-7901、AGS细胞凋亡,使SGC-7901细胞周期阻滞于S期,AGS细胞周期阻滞于G1期。