论文部分内容阅读
胃癌(Gastric cancer,GC)是全球范围内致命的恶性肿瘤之一,我国是胃癌的高发区。尽管近几十年来胃癌通过手术治疗和其他辅助治疗,在较大程度上有了改善,但由于术后复发和病灶的转移,长期生存率仍然不如人意。近10年已有很多实验研究结果证明诱导癌细胞凋亡是预防和治疗恶性肿瘤的良好治疗策略。细胞的凋亡过程是细胞死亡的必要生理过程,细胞凋亡实际是一种程序性死亡,主要是依赖于ATP,是机体的一个自我保护机制,为了使机体的细胞数量保持稳定,而从系统中清除不必要的或不健康的细胞。而细胞凋亡失调可直接导致多种疾病,其中恶性肿瘤的形成与其关系密切。细胞凋亡的过程是复杂的,并不是单一因素诱导的。目前研究认为主要的凋亡信号通路有3条。分别是线粒体介导的细胞凋亡信号通路、内质网应激介导的细胞凋亡信号通路及死亡受体介导的细胞凋亡通路。凋亡的信号通络便由这三者共同构成。本文中主要是研究了线粒体途径介导的凋亡信号通路。中华民族历史悠久,具有传统特色的中药在世界上都是富有盛名的,本文中研究的中药南蛇藤(Celastrus orbiculatus extracts,COE)为卫矛科植物,南蛇藤属,课题组前期已有研究证明,南蛇藤提取物具有显著的抗肿瘤活性,可以有效地抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭转移及血管生成,并且能够促进肿瘤细胞凋亡。本研究论文的主要目的是探讨和研究南蛇藤提取物对SGC-7901和MKN45细胞增殖与凋亡的影响,进一步探讨从线粒体途径揭示南蛇藤提取物诱导SGC-7901和MKN45细胞凋亡的内在分子调控机制。实验研究结果显示,南蛇藤提取物能促进SGC-7901和MKN45细胞凋亡,其促进胃癌细胞凋亡的分子机制与线粒体代谢有关。本课题的研究的主要分为以下内容。第一章探讨南蛇藤提取物对人胃癌MKN45和SGC-7901细胞株增殖、凋亡的影响目的:研究南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)对生长期人胃癌MKN45和SGC-7901细胞在增殖和凋亡方面的作用和影响。方法:取对数生长期的人胃癌MKN45和SGC-7901细胞,设置不同浓度COE组(10,20,40,80,160,320mg/L)、空白对照组(不做处理),采用MTT法检测各药物浓度组分别对人胃癌MKN45和SGC-7901细胞增殖的影响;采用透射电镜观察经药物COE(80mg/L)处理后人胃癌MKN45和SGC-7901细胞超微结构的变化,同时设置阳性对照组(5-Fu,32 mg/L);采用流式细胞术检测不同浓度COE(20,40,80mg/L)对人胃癌MKN45和SGC-7901细胞凋亡的影响。结果:在一定的药物浓度范围内,COE能够有效抑制人胃癌MKN45和SGC-7901细胞的增殖,在药物COE(80mg/L)处理胃癌细胞后,细胞的超微结构出现了异常,比如细胞皱缩,体积变小,细胞核固缩,染色质边聚等现象。加入不同浓度的COE后促进了人胃癌MKN45和SGC-7901细胞的凋亡进程,呈浓度依赖性(*p<0.05,**p<0.01)。结论:COE能够促进人胃癌MKN45和SGC-7901细胞凋亡,抑制细胞的增殖能力。第二章探讨南蛇藤提取物诱导MKN45和SGC-7901细胞凋亡的内在分子机制目的:探讨南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)对人胃癌MKN45和SGC-7901细胞线粒体功能及相关蛋白表达的影响,初步研究抑制胃癌发生发展的可能分子机制。方法:收集人胃癌MKN45和SGC-7901细胞,对其进行药物干预,设置不同浓度的COE组(20,40,80mg/L)、阳性对照药物5-Fu(32mg/L)、空白对照组(不做处理),干预24h后,提取总蛋白,采用Western blot方法检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2和Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9)的表达水平。采用透射电镜观察经COE(80mg/L)处理后人胃癌MKN45和SGC-7901细胞内线粒体结构的变化。采用荧光显微镜观察线粒体膜电位的变化,共聚焦显微镜观察线粒体质量的变化,流式细胞术检测细胞内总ROS水平的变化。结果:COE可以降低MKN45和SGC-7901细胞中线粒体膜电位以及线粒体质量,同时可以增加ROS的水平。与野生组相比,COE组线粒体出现了嵴排列紊乱不明显,呈空泡状及线粒体肿胀等现象。COE组中Bcl-2的蛋白表达水平呈下降趋势,而Bax、Cyt-C、Caspase-3和Caspase-9的蛋白表达量出现了随着COE浓度的增加而增加的变化趋势。结论:COE促进人胃癌MKN45和SGC-7901细胞凋亡的分子机制可能与线粒体途径相关。