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目的:
观察急性百草枯中毒大鼠血清、肺泡灌洗液和肺组织匀浆氧化应激水平变化及二巯丙磺钠的干预影响,探讨大鼠百草枯致肺损伤的机制和二巯丙磺钠的保护作用。
方法:
1.清洁级雄性SD大鼠80只,随机分成4组。正常对照组NC组):8只,予相应体积的生理盐水腹腔注射。二巯丙磺钠对照组(Na-DMPS组):8只,以200mg/kgNa-DMPS腹腔注射。百草枯急性中毒组(PQ组):32只,予1%的百草枯溶液(20mg/kg)一次性左腹腔注射染毒。二巯丙磺钠干预组(PQ+Na-DMPS组):32只,予右腹腔注射200mg/kg Na-DMPS后15min,予1%百草枯20mg/kg一次性左腹腔注射染毒,建立大鼠PQ急性中毒Na-DMPS保护模型。NC组及Na-DMPS对照组于处理后1d,PQ组及PQ+Na-DMPS组分别于染毒后6h、1d、3d、7d每时间点取8只,以10%的水合氯醛麻醉大鼠,下腔静脉取血,留取血清,并行右侧支气管肺泡灌洗,用5ml生理盐水反复灌洗3次,最后一次回收的液体离心后留取上清液待测,取左肺相同部分肺组织制备匀浆(100mg肺组织:0.9ml生理盐水),余肺组织用于Nrf2mRNA的检测。检测各组血清、支气管肺泡灌液、肺组织均浆中的CAT活力、MDA水平,检测各组血清、肺组织均浆中的GSH含量。
2.采用Trizol试剂提取各组大鼠肺组织总RNA,以总RNA为模板,逆转录成cDNA。然后以cDNA为模板,以大鼠Nrf2引物进行PCR扩增反应。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,电泳结果用凝胶成像系统成像,Gel-Prov3.1分析软件进行分析,以(目的基因/β-actin)为该基因表达的相对值。
3.计量资料采用均数±标准差(x±S)表示,应用SPSS13.0进行方差分析,以P<0.05为差异有显著性意义。
结果:
1.各组大鼠MDA水平变化:
NC组及Na-DMPS组大鼠血清、BALF和肺组织匀浆MDA水平较低,两组相比无统计学差异。同NC组相比,PQ组染毒后6h、1d、3d、7d的血清、BALF和肺组织匀浆中MDA水平均明显升高,在6h、1d达到高峰,之后逐渐降低,除第7d血清MAD水平外,与NC组相比均有统计学差异(P<0.05)。同NC组相比,PQ+Na-DMPS组大鼠血清、BALF和肺组织匀浆MDA水平变化趋势与PQ组相似,但与相同时间点的PQ组相比,PQ+Na-DMPS组血清、BALF和肺组织匀浆MDA水平均有不同程度降低,其中6h及ld差异有统计学意义(P<0.05)。
2.各组大鼠CAT活力变化:
Na-DMPS组较NC组大鼠血清、BALF和肺组织匀浆CAT活力轻度升高,两组相比无统计学差异。同NC组相比,PQ组中毒后6h、1d、3d、7d的血清、BALF和肺组织匀浆CAT活力均明显下降(P<0.05),6h时最明显。同NC组相比,PQ+Na-DMPS大鼠血清、BALF和肺组织匀浆CAT活力变化趋势与PQ组相似,但与相同时间点的PQ组相比,PQ+Na-DMPS组血清、BALF和肺组织匀浆CAT均有不同程度升高,其中6h、1d及3d差异有统计学意义(P<0.05)。
3.各组大鼠GSH含量变化:
Na-DMPS组较NC组大鼠血清和BALF中GSH含量轻度下降,两组相比无统计学差异。同NC组相比,PQ组中毒后各时间点的血清和BALF中GSH含量均明显下降(P<0.05),血清GSH含量在6h时最低,1d后逐渐回升,BALF中GSH含量1d时最低,3d后回升。同NC组相比,PQ+Na-DMPS组大鼠血清和BALF中GSH含量变化趋势与PQ组相似,但与相同时间点的PQ组相比,PQ+Na-DMPS组血清和BALF中GSH含量均有不同程度升高,其中血清6h及3d、BALF1d及3d差异有统计学意义(P<0.05)。
4.各组大鼠肺组织Nrf2mRNA表达的变化:
NC组及Na-DMPS组大鼠肺组织Nrf2mRNA表达的水平均较低,两组相比无统计学差异。同NC组相比,PQ组中毒后各时间点的Nrf2mRNA表达的水平均有提高,3d达高峰,其中1d、3d及7d差异有统计学意义(P<0.05)。同NC组相比,Na-DMPS干预后大鼠肺组织Nrf2mRNA表达的变化趋势与PQ组相似,但与相同时间点的PQ组相比,PQ+Na-DMPS组均有不同程度进一步增多,其中1d及3d差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:
1.大鼠急性百草枯中毒6h后血清、BALF、肺组织匀浆即出现明显MDA水平上升,GSH含量和CAT活力下降,肺组织Nrf2mRNA表达量上升。
2.Na-DMPS可明显降低百草枯中毒大鼠体内MDA水平,提高CAT活力、GSH含量及Nrf2mRNA表达量,有利于体内氧化-抗氧化系统的平衡恢复。
3.脂质过氧化反应是百草枯造成机体组织损伤的重要机制之一,Na-DMPS通过提高体内抗氧化系统发挥保护作用。