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背景及目的:胰腺癌是恶性程度极高的实体肿瘤,五年生存率仅有8%,大部分病人初次诊断就已经出现局部进展或转移,失去根治性手术机会。因此,探索胰腺癌发生转移的机制,理解转移的生物学行为,并进一步探索治疗新靶点意义重大。在转移的研究历史中,英国外科医生StephenPaget的“种子-土壤”假说影响深远。其重要的意义在于认识到了只有肿瘤细胞(种子)与转移宿主器官(土壤)相互匹配才能促使转移的发生,为后来的转移微环境概念的提出奠定了基础。肿瘤相关成纤维细胞是肿瘤微环境的重要组成部分。其能够分泌各种信号蛋白来促进肿瘤细胞的生长、诱导血管生成、侵袭性增强。而且,循环肿瘤细胞在宿主器官中定植并且能够招募肿瘤相关成纤维细胞参与构建肿瘤转移微环境促进转移灶形成。外泌体是各种细胞在正常或病理情况下分泌的直径在30-100nm的双层膜结构囊泡。其囊泡内所携带的蛋白、脂质、核酸等物质可通过旁分泌及远距离分泌等方式作用于靶细胞,实现细胞之间的信息传递。Lin28B是可同时表达于细胞核与细胞质当中的RNA结合蛋白。Lin28B与多种恶性肿瘤的发生、进展、转移密切相关,并且高表达于多种癌细胞系中。在胰腺癌细胞系中,Lin28B/let-7通路激活,可以促进下游的c-MYC、HMGA2、KRAS等表达增强,促进胰腺癌细胞进展和转移。因此,本研究旨在探究,胰腺癌来源的外泌体能否促进转移灶中循环肿瘤细胞对肿瘤相关成纤维细胞的招募作用及其背后可能的机制,以期发现肿瘤诊疗的新靶点。方法:1从胰腺癌细胞系中筛选出转移能力强的细胞系PANC-1和MIAPaCa-2。2PANC-1和MIAPaCa-2培养、传代、收集条件培养基、超速离心获取胰腺癌源性外泌体。外泌体验证及内吞实验证明外泌体能够进入胰腺癌细胞。3用胰腺癌源性外泌体处理胰腺癌细胞系,Transwell实验观察其对胰腺星状细胞(pancreatic stellate cell,PSC)的招募作用。并排除其他可能促进招募作用增强的因素。4 western blotting验证招募相关蛋白PDGFB的表达水平,同时验证PSC中PDGFRβ的表达,排除招募作用因为受体蛋白表达水平升高而升高。5通过回顾文献找到胰腺癌转移密切相关的蛋白分子Lin28B。western blotting、PCR等实验验证外泌体中Lin28B的表达水平,其在招募过程中起的作用,并找到其潜在的下游通路。6通过脾脏注射胰腺癌细胞PANC-1建立转移瘤模型,并通过体内荧光成像实验进一步验证癌源性外泌体是否能够促进胰腺癌细胞对PSC的招募作用。结果:1胰腺癌来源的外泌体能够进入到胰腺癌细胞中,促进胰腺癌细胞对PSC招募作用。2外泌体处理组PDGFB的表达显著增强,而外泌体与PSC共培养并不会引起PDGFRβ表达水平的变化。3外泌体中富含Lin28B,且外泌体能够进入胰腺癌细胞中,引起Lin28B在胰腺癌细胞中含量增多,促使其下游的肿瘤抑制分子let-7水平下降,致癌因子HMGA2、c-Myc表达水平上升。结论:本研究提示胰腺癌来源的外泌体可以促进胰腺癌细胞对CAFs(PSC)的招募作用,而且该病理过程是通过Lin28B/let-7通路调控的。