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副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPS)是一种多形性的革兰氏阴性短杆菌，属巴斯德杆菌科、嗜血杆菌属，是一种存在于猪上呼吸道的共栖菌，可引起以多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎为主要特征，死亡率较高的猪格氏病。该菌已鉴定的有15个血清型，还有部分不能定型的菌株，各菌株之间缺乏交叉免疫保护性，关于其毒力因子和致病机制仍不十分清楚。外膜蛋白（Outer memberprotein，Omp）是副猪嗜血杆菌可能的毒力因子之一，其中外膜蛋白Omp P5是该菌的一种主要粘附蛋白，与细菌的定植有关，是副猪嗜血杆菌主要外膜蛋白之一，用其制备的多抗血清与各血清型HPS菌株抗原之间有交叉反应性，是一种可能的保护性抗原。单克隆抗体有着特异性强、重复性好的特点，广泛应用于传染病的诊断、治疗、检疫、预防和流行病学研究中的应用。本研究用灭活后的血清5型HPS菌株免疫Balb/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合制备Omp P5单克隆抗体；用Omp P5蛋白经间接ELISA检测方法筛选阳性融合孔，用有限稀释法对筛选出的阳性融合孔进行亚克隆，获得了2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1E2和8D9；用间接ELISA法测定1E2、8D9两株杂交瘤细胞培养上清抗体效价，效价均为1:2560；同法测定小鼠纯化后腹水抗体效价，分别为1:204800和1:51200；用亚型鉴定试剂盒对单克隆抗体的亚型进行鉴定，结果显示单抗1E2为IgG2b、8D9为IgG2a；用本实验室建立的基于HPS Omp P2的间接ELISA方法对两株单抗的特异性进行检测，结果表明两株单抗均具有良好的特异性；用激光共聚焦扫描显微镜进行免疫荧光检测，发现制备的单克隆抗体与天然蛋白抗原具有明显的反应性；将两株杂交瘤细胞冻存3次复苏后仍能分泌抗体，并且效价稳定。这些生物学特性研究表明，本试验筛选出的两株Omp P5单克隆抗体1E2、8D9可用于副猪嗜血杆菌的检测与Omp P5蛋白的进一步研究。