RNA干扰(RNA interference，RNAi)是双链RNA(double-strand RNA，dsRNA)引起的基因沉默现象。DsRNA在Dicer酶的作用下被剪切成小干扰RNA(Smallinterfering RNA，siRNA)，siRNA与Argonaute蛋白及伴侣分子形成RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，随后，特异地沉默与之互补配对的mRNA。近年来研究表明，利用RNAi技术沉默昆虫生长发育过程中重要基因的表达，可以导致昆虫发育畸形或死亡，从而达到杀虫的目的，所以，RNAi极有可能作为一种新的、环境友好型杀虫技术应用于农业害虫防治。但是，随着研究的深入，发现作为主要农业害虫的鳞翅目昆虫，RNAi效率普遍偏低，而且不同基因的RNAi效率也存在明显差异。本论文以鳞翅目昆虫亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）为研究对象，深入研究其RNAi存在的问题，尽可能找到提高RNAi效率的方法，进而更好地指导RNAi技术应用于实际生产。本论文的研究结果如下:　　首先，对亚洲玉米螟糜蛋白酶家族的7个基因以及不同功能的12个基因通过饲喂或注射dsRNA的方式进行RNAi试验。结果表明:同一家族基因的RNAi效率存在显著差异，不同功能的基因，RNAi效率也明显不同。同时还发现，给予玉米螟机械损伤，注射生理盐水，注射外源dsEGFP均会引起部分基因的上调，而且外源dsEGFP也能够引起SP基因的下调。这些结果引起了我们对昆虫RNAi机理及不同基因RNAi效率的重新认识。　　为了分析不同基因的RNAi效率，我们对亚洲玉米螟五龄幼虫分别注射外源基因EGFP以及内源基因Mlp的dsRNA，处理6小时后取样，并进行转录组测序。结果发现，能够被两种类型的dsRNA共同诱导上调或下调基因分别有160个和44个。这说明dsRNA进入机体后，会引起体内大量非靶标基因发生变化。随后，我们分别挑选50个被dsRNA诱导上调、25个下调以及43不受dsRNA影响的基因，合成各自的dsRNA注射玉米螟5龄幼虫，6小时后检测各自基因被抑制情况。结果表明，能够被任意一种dsRNA诱导下调的基因，也很容易被自身的dsRNA诱导下调;被任意一种dsRNA诱导上调或者对dsRNA没有响应的基因，注射自身的dsRNA后，有些基因能够被抑制，有些基因不仅不能够被抑制，反而表达量上调。该研究结果提醒我们:昆虫中有些基因很难被自身的dsRNA所抑制。同时，这些结果还可以为我们选取有效的RNAi靶标提供参考。　　上述被dsRNA诱导上调的基因中，除了参与机体的免疫应激反应外，有些基因很可能参与了昆虫对dsRNA的特异响应，是昆虫RNAi通路相关基因。我们用细菌、真菌、病毒等不同类型微生物诱导处理亚洲玉米螟幼虫，在处理后6小时和12小时，共检测了23个受dsRNA诱导上调基因的变化情况。结果表明，大部分被dsRNA诱导上调的基因，受不同病原菌处理后也能够被诱导上调，这些基因很可能参与了机体对病原菌的免疫应激反应。除此之外，我们还发现了7个只能被dsRNA诱导表达的基因，推测这些基因很可能与昆虫的RNAi通路密切相关，这7个基因中包括已知的RNAi通路关键基因Ago-2和Dicer-2。本研究结果为我们提供了5个新的昆虫RNAi通路相关基因，有助于我们进一步了解鳞翅目昆虫的RNAi通路及其作用机理，探索提高鳞翅目昆虫RNAi效率的途径。　　对另外5个新发现的仅受dsRNA诱导表达的基因进行分析，发现其中的up56基因在dsRNA处理后，呈现异常高的诱导表达倍数。通过对该基因序列以及系统进化分析发现，该基因能够编码PIN结构域的蛋白，并且仅在鳞翅目昆虫中特异表达。同时，up56能够与已知RNAi通路基因Ago-2、Dicer-2在基因表达水平上互相影响。抑制up56基因的表达，能够显著提高玉米螟RNAi效率。对该基因组织表达情况进行分析发现，up56主要存在于中肠。同时发现，中肠粗提物对于不同类型核酸的消化剪切效率与up56的表达量呈正相关。小RNA测序结果表明，up56基因的表达量能够影响由dsRNA剪切而成的small RNA的种类和个数。对up56基因诱导及抑制后的玉米螟中肠以及脂肪体进行转录组测序分析，结果发现，抑制up56基因的表达，中肠大量核酸酶、蛋白酶基因被明显地抑制，而蛋白酶抑制剂基因的表达量则显著提高。这些大量被抑制的核酸酶，很有可能与up56一起，通过降低机体对于dsRNA的无义剪切，提高有效siRNA的富集，进而提高RNAi效率。在这些变化的基因中，发现2个核酸外切酶(exonuclease，exosome complex exonuclease PPR44)以及1个解旋酶(helicaseMOV10)与up56具有相似的表达模式，能够随着up56的上调而上调，下调而下调，并且与up56一样，只能被dsRNA诱导表达，这些基因很有可能与up56相互作用，行使功能，对鳞翅目昆虫RNAi效率产生影响。