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背景心血管及血栓性疾病仍然是世界上发病与死亡的主要原因。在这些疾病中,凝血酶作为一种多功能的丝氨酸蛋白水解酶在凝血级联中发挥着关键作用,主要是将可溶的纤维蛋白原转化为难溶的纤维蛋白。目前,抑制凝血酶已经成为治疗心血管及血栓性疾病的一种有效策略。方法本文采用凝血酶特异性荧光探针Z-GGRAMC乙酸盐作为底物构建人凝血酶抑制剂体外筛选模型,在体外进行中药化合物高通量的筛选实验（52种）。试图从中发现抑制潜能较强的化合物,并选取抑制潜能最强的化合物（金丝桃素）,详细探究其抑制动力学及分子对接模拟机制。金丝桃素是圣约翰草的主要活性成分之一,为进一步分析探究其对人凝血酶的作用及其机制,收集了圣约翰草提取物及其来源的20种商业化主要活性成分,以黄芩素作为阳性对照。采用基于荧光的生物化学方法仔细研究了圣约翰草提取物及其主要天然成分对人凝血酶的抑制作用。结果体外初筛表明橙黄决明素等15种化合物可能具有凝血酶抑制潜力（抑制剂浓度为100μM时,凝血酶的残余活性低于50%）。对这15种化合物进行剂量-抑制曲线分析并比较,结果显示金丝桃素具有最强的人凝血酶抑制能力。以圣约翰草为模式的进一步结果表明,圣约翰草提取物有较好的凝血酶抑制潜力,其主要活性成分中大多数萘骈二蒽酮类化合物,黄酮类化合物和双黄酮类化合物显示出对人凝血酶的强至中等抑制活性。在这20种化合物中,金丝桃素显示出对人凝血酶最强的抑制能力,IC50值为3.00μM。抑制动力学表明,金丝桃素是人凝血酶介导Z-GGRAMC乙酸盐水解的混合性抑制剂,Ki值为2.58μM。此外,分子对接模拟显示金丝桃素可以同时结合人凝血酶的活性中心和两个阴离子结合外部位点（ABE1和ABE2）,这与其混合抑制模式相吻合。结论在这项研究中,第一次仔细研究了圣约翰草提取物及其来源的二十种成分对凝血酶（凝血级联中的关键酶）的抑制作用。结果清楚地表明,来自圣约翰草的大多数萘骈二蒽酮,以及双黄酮和一些黄酮类化合物对凝血酶的蛋白水解活性显示出强烈至中等的抑制作用,IC50值范围为3.00μM至66.15μM。在所有测试的化合物中,金丝桃素对凝血酶显示出最有效的抑制作用,IC50值为3.00μM。对抑制动力学的进一步研究表明,金丝桃素是抗凝血酶介导的Z-GGRAMC乙酸盐水解的混合型抑制剂,金丝桃素的Ki值分别为2.58μM。分子对接模拟表明,金丝桃素可同时结合活化中心和两个阴离子结合外部位点（ABE1和ABE2）,这与金丝桃素的抑制模式一致。总之,这些研究结果表明,圣约翰草的大多数成分是凝血酶的直接抑制剂,而金丝桃素是具有二蒽酮母核的一种天然凝血酶抑制剂,可用作开发具有更加安全的新的凝血酶抑制剂的一种先导化合物。