背景和目的：据报道，2016年美国新发癌症将达到1,685,210，癌症死亡人数将达到595,690。其中前列腺癌（PCa）新发病例将达到180,890人，死亡病例达26,120人，前列腺癌已经成为了美国男性中发病率最高，死亡率第二的恶性肿瘤。　　尽管目前治疗局限性前列腺癌已经取得了巨大的进步，包括可以采用外科手术或放射治疗，但是随着病情的进展，疾病最终会进展成转移性的，去势抵抗型前列腺癌（CRPC）。目前对于CRPC没有有效的治疗办法，预后较差。免疫治疗是目前比较理想的治疗手段，主要通过激活病人自身的免疫系统来诱导杀伤肿瘤细胞。但是，免疫治疗急需探寻一个理想的治疗靶点。　　Reiter等使用代表性差异分析法（RDA）在LAPC-4移植瘤中评估了多种抗原，确认前列腺癌干细胞抗原（PSCA）具有前列腺特异性，并且在大部分前列腺癌中过表达。PSCA定位在染色体8q24.2，由660bp组成，有一个氨基端和羧基端的糖基磷脂酰肌醇（GPI）序列，以及大量的糖基化位点。许多研究已经证实PSCA与前列腺癌的进展及转移相关，尤其在骨转移中全部呈阳性表达。课题组也发现PSCA的表达与前列腺癌分期，Gleason评分，雄激素抵抗呈正相关。因此，PSCA可能是前列腺癌免疫治疗的一个良好的靶点。　　现有的关于PSCA的研究大都集中在研究临床前列腺癌标本与临床分期，病理分级，及预后等的关系方面，而关于PSCA在前列腺癌中的具体的生物学功能，以及PSCA在前列腺癌中的具体作用机制，仍然不清楚。PSCA属于胸腺细胞分化抗原1/淋巴细胞抗原6家族（Thy-1/Ly-6)，Thy-1/Ly-6家族的成员功能非常多样，包括T细胞的激活，以及神经系统中的凋亡调节等。　　因此，为了研究PSCA在前列腺癌中的生物学功能，并且探讨其影响前列腺癌发生发展的机制，我们课题组首先测定了PSCA在各种前列腺癌细胞株中的表达，然后构建了沉默及过表达PSCA的稳定细胞株，通过体内外实验探讨了PSCA在前列腺癌增殖，迁移及侵袭中的作用及其机制。　　方法：　　1．qRT-PCR及Western blot检测前列腺癌细胞株中PSCA的表达水平。使用qRT-PCR检测雄激素去势抵抗型前列腺癌细胞株DU145，雄激素依赖型细胞株LNCAP，及正常的前列腺上皮细胞RWPE-1细胞株中PSCA mRNA及蛋白的表达，初步明确各细胞株PSCA的表达水平。　　2．构建稳定沉默PSCA及稳定过表达PSCA的细胞株。首先筛选干扰效率最高的干扰序列，包装成慢病毒液，然后病毒液感染DU145细胞株，嘌呤霉素筛选构建稳定沉默 PSCA的 DU145细胞株 DU145 shRNA＃1，及稳定转染无关序列的DU145稳定细胞株DU145 scramble。同样，首先合成表达PSCA全长的序列，包装成慢病毒液，病毒液感染LNCAP细胞株，嘌呤霉素筛选构建稳定过表达PSCA的LNCAP细胞株LNCAP PSCA，及对照的空载体LNCAP稳定细胞株LNCAP vector。　　3． PSCA对前列腺癌细胞生物学行为的影响。采用已经构建好的稳定沉默 PSCA的 DU145细胞株，及稳定过表达PSCA的LNCAP细胞株，首先进行了体外的MTS和平板克隆形成实验检测前列腺癌细胞的增殖，采用划痕实验，transwell迁移和侵袭实验探讨了PSCA对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响。进一步在体内研究了PSCA对前列腺癌移植瘤生长，转移的影响，我们给SCID鼠接种了稳定沉默PSCA的DU145细胞株及稳定过表达PSCA的LNCAP细胞株，观察移植瘤的体积，重量变化，并且行小鼠的 MRI检测是否发生了侵袭和转移。取下移植瘤组织，行相关指标的 qRT-PCR，WB，及免疫组化的检测。　　4． PSCA调控前列腺癌增殖及迁移侵袭的机制。为了进一步探讨PSCA影响前列腺癌增殖，迁移及侵袭的作用机制，我们研究了稳定沉默PSCA的DU145的细胞株和体内移植瘤，及稳定过表达PSCA的LNCAP细胞株和体内移植瘤中PI3K/AKT及MAPK/ERK通路的情况，我们采用了Western blot的方法检测p-AKT，AKT，p-ERK1/2及ERK1/2在各个细胞株及移植瘤中的表达情况。　　结果：　　1．PSCA表达在DU145中较高，在LNCAP中较低。对前列腺癌细胞株进行了PSCA mRNA及蛋白水平的分析，结果显示雄激素去势抵抗型前列腺癌细胞株DU145的PSCA水平相对较高，而雄激素依赖型细胞株LNCAP水平相对较低，说明了在前列腺癌细胞中，PSCA的表达随雄激素敏感到雄激素抵抗逐渐升高，与我们课题组前期在临床标本中的研究趋势一致。　　2．成功构建了下调PSCA的DU145稳定细胞株和上调PSCA的LNCAP稳定细胞株。选取了PSCA水平相对较高的DU145进行下调表达，PSCA水平相对较低的LNCAP进行上调表达，进行稳定细胞株的构建。稳定株PSCA mRNA及蛋白的检测结果证实成功构建了下调PSCA的DU145稳定细胞株和上调PSCA的LNCAP稳定细胞株。　　3．PSCA可抑制前列腺癌的增殖，促进前列腺癌的体外迁移侵袭。体内外实验结果表明沉默PSCA后，前列腺癌细胞增殖及体内移植瘤的生长均明显增加，而过表达恰好相反。同时体外实验也证实沉默PSCA后，迁移和侵袭降低，过表达则反之。同时在体内移植瘤实验中，发现各个细胞株均没有发生明显的侵袭和转移，说明了PSCA可抑制前列腺癌癌细胞的增殖和移植瘤的生长，促进前列腺癌体外的迁移和侵袭，PSCA对前列腺癌体内的侵袭和转移需要进一步来研究确认。　　4. PSCA通过PI3K/AKT通路减缓前列腺癌的增殖，促进前列腺癌的体外迁移和侵袭。进一步探讨了影响前列腺癌细胞增殖及侵袭转移的机制，我们通过Western blot检测了PI3K/AKT, MAPK/ERK通路，研究发现，无论是体外，还是体内，下调PSCA的表达促进了p-AKT水平的增加，而过表达反之；同时，无论是PSCA敲低的DU145，还是PSCA过表达的LANCP，p-ERK1/2的水平都没有发现明显的差异。结果表明，PSCA可能是通过PI3K/AKT途径抑制增殖，同时促进体外的迁移和侵袭的。PSCA对增殖，迁移和侵袭的影响均与MAPK/ERK无显著性关系。　　结论：　　1. PSCA抑制前列腺癌细胞的体外增殖和体内移植瘤的生长，同时促进前列腺癌体外迁移和侵袭。　　2. PSCA通过 PI3K/AKT调控前列腺细胞的增殖、迁移和侵袭以及移植瘤的生长，不依赖 MAPK/ERK信号通路。