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第一部分骨癌痛模型的建立及疼痛行为学评估[目的]评价在雌性成年Sprague-Dawley大鼠胫骨内接种Walker256乳腺癌细胞建立骨癌痛模型的可行性。[方法]将18只清洁级雌性成年Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:空白对照组(n=6),假手术组(n=6),癌痛组(n=6)。将含有 15μl 1x105/ml Walker256乳腺癌细胞悬液注入右后肢胫骨平台下1cm左右的骨髓腔内制备骨癌痛模型,于建模当天、建模后第3、6、9、12、14天分别检测大鼠的体重、使用疼痛行为学测量机械痛阈值,建模第14天后取出肿瘤组织进行组织学检查验证。[结果]本部分研究发现使用Walker256大鼠乳腺癌细胞能成功制备SD大鼠胫骨骨癌痛模型。建模第6天后各时间点,与空白对照组相比,假手术组大鼠右后肢机械痛阈值差异没有统计学意义(P>0.05);与空白对照组、假手术组相比,癌痛组右后肢机械痛阈值差异有统计学意义(P<0.05),与空白对照组和假手术组相比之下,骨癌痛组胫骨骨髓腔内破坏明显,存在骨质、骨小梁溶骨性骨质结构破坏,腔内充满大量肿瘤细胞,可见癌细胞通过破坏的骨髓腔向腔外浸润生长。[结论]使用Walker256乳腺癌细胞能够成功建立大鼠胫骨癌痛模型。第二部分在骨癌痛模型中吗啡对肿瘤组织中MOR表达水平、微血管密度的影响[目的]通过检测机械痛阈值来评估不同剂量的吗啡在SD大鼠骨癌痛模型中的镇痛治疗效果,并通过检测肿瘤组织中μ阿片受体(mu opioid receptor,MOR)表达水平以及肿瘤微血管密度,初步探讨吗啡对肿瘤进展的影响。[方法]选择清洁级雌性成年SD大鼠进行实验,使用Walker256乳腺癌细胞成功建立骨癌痛模型后,采用随机数字表法将建模成功的24只SD大鼠分为3组:M0组(生理盐水(NS)对照癌痛组)8只,M1组(3mg/kg吗啡癌痛组)8只,M2组(6mg/kg吗啡癌痛组)8只,另外选择8只正常雌性成年大鼠作为C组(空白对照组)。定时于每日9:00AM进行1次腹腔注射,连续21天。实验组根据大鼠体重计算吗啡剂量,并用NS稀释至1ml体积进行腹腔注射,对照组则直接注射1ml NS。全部大鼠腹腔注射后30min后进行机械痛阈值测定,连续腹腔注射21天后将大鼠予以过量的吸入麻醉后处死,取出右后肢胫骨进行HE染色,应用Western Blot测定组织中MOR表达水平,应用免疫组化染色测量组织中CD31阳性率且采用热点法计数测量微血管密度(microvascular density,MVD)。[结果]1.吗啡增加了右后肢机械痛阈值:1)给药后,M1组、M2组大鼠右后肢机械痛阈值与C组接近(P>0.05);2)给药后,M1组、M2组大鼠右后肢机械痛阈值明显高于M0组(P<0.05);3)给药后,M1组大鼠右后肢机械痛阈值与M2组达到相同水平(P>0.05)。2.吗啡增加了肿瘤组织中MOR表达水平:1)M0组、M1组、M2组中肿瘤组织中MOR表达水平明显高于C组(P<0.05);2)M1组、M2组中MOR的表达水平高于M0组(P<0.05);3)M2组中MOR表达水平高于M1组(P<0.05)。3.吗啡增加了肿瘤组织中MVD:1)M0组、M1组、M2组肿瘤组织中MVD明显高于C组(P<0.05);2)M1组、M2组肿瘤组织中MVD值高于M0组(P<0.05);3)M2组肿瘤组织中MVD值高于M1组(P<0.05)。[结论]在SD大鼠骨癌痛模型中,吗啡可能通过上调肿瘤组织中MOR的表达水平促进肿瘤组织中微血管密度增加。