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目的 探讨原发性肝癌中多药耐药基因编码的P-sp表达对肝动脉化疗栓塞术疗效的影响。同时探讨应用化疗药物诱导传代的VX2肿瘤建立移植性耐药肝癌模型以及利用耐药逆转剂进行耐药逆转研究的可行性。 材料与方法 1．临床研究 47例未经过治疗的原发性肝癌患者，依据病人一般状况和肝功，应用不同剂量化疗药物与碘油混合制成碘油-化疗药物乳剂经肝动脉栓塞。其中33人应用常规剂量化疗药物(表阿霉素或阿霉素40mg、丝裂霉素20mg、氟尿嘧啶500mg)；14人应用半剂量化疗药物(表阿霉素或阿霉素20mg、丝裂霉素10mg、氟尿嘧啶500mg)。介入治疗前，在透视引导下，应用18G活检穿刺针经皮、经肝穿刺活检。10％中性福尔马林固定活检肿瘤组织，石蜡包埋，制成4μm厚连续切片。应用JSB-1鼠抗人单克隆抗体，采用链霉亲合素-生物素酶复合物法进行免疫组化染色，检测原发性肝癌中MDR1编码的P-gp表达。光镜下观察200个肿瘤细胞并计算阳性细胞数，平均阳性细胞数＞10％为阳性。首次肝动脉化疗栓塞后2个月进行CT检查，与治疗前比较，按公式(V)=1／2ab~2计算肿瘤体积，按WHO推荐的实体肿瘤疗效判定标准判定疗效，肿瘤体积缩小超过50％为有效。同时分析P-gp表达以及不同化疗药物剂量对肝动脉化疗栓塞术治疗疗效的影响。 2．动物实验 健康日本大耳白兔35只，10只用于肿瘤传代，25只用于建立移植性肝癌模型。携带VX2肿瘤大耳白兔2只，将其中一只麻醉，无菌条件下取出大腿肌肉内传代的肿瘤组织，制成肿瘤悬液注人传代兔大腿肌肉进行常规传代。另一只于传代后2周，连续三周，每周一次，经耳廓后静脉注人阿霉素注射液(4mg乃耐次)进行间歇性耐药诱导。第三次化疗结束后一周，取肿瘤组织，再次传代、化疗，共进行三次传代，每次进行三次化疗。25只健康大耳白兔随机分为五组，每组5只，全麻下腹正中线切口，暴露肝脏，在肝左叶中部植人1~，的vxZ肿瘤组织，建立移植性肝癌模型。A、B两组植人肿瘤组织取自常规传代兔，C、D、E三组植人的肿瘤组织取自经过多次传代、化疗药物诱导的传代兔。肝脏内肿瘤植人3周后，进行增强CT检查，确定肿瘤大小。将肝癌模型兔麻醉，无菌条件下腹正中切口，暴露肝动脉，直视下穿刺，分别注人不同化疗药物或生理盐水。其中，A、C两组注人阿霉素4mg(2耐生理盐水稀释)B、D两组注人等量生理盐水，E组经肝动脉注人异搏定lmg(0.2以)和阿霉素4mg(2而生理盐水稀释)。治疗后一周再次进行增强CT检查并与用药前比较，分析各组肿瘤倍增率。处死全部兔，取边缘肿瘤组织，分别于一70℃冻存，ro%中性福尔马林、2.5%戊二醛固定。HE染色和制备电镜标本，光镜和透射电镜(JEM一1200EX)下观察VxZ肿瘤结构。冻存肿瘤组织制成单细胞悬液，PI染色，流式细胞仪检测分析各组肿瘤凋亡率。 3.统计学分析 应用sPsslo.0软件分析实验结果，采用xZ检验和Fishar精确概率检验法、方差分析进行统计学处理，尸<0.05为有显著意义。结、果 1 .47例原发性肝癌病人中，34例P一gP表达阳性，表现为细胞膜和细胞浆均匀或散在棕色颗粒，染色阳性率为72.3%。P一gP阳性表达与性别、乙型肝炎、Child分级、病灶数目、病灶大小、有无包膜、有无门脉栓子等临床病理因素无关。 2.应用常规剂量化疗药物与碘油制成乳剂栓塞的33例HCC患者中，P一gP阳性表达率为69.7%(23/33)。P一gP阴性患者TACE治疗有效率显著高于阳性患者(尸<0.05);应用半剂量化疗药物栓塞的14例HCC中，P一gP阳性表达率为78.6%(11/14)，P一gP阴性与阳性患者间TACE治疗疗效无显著差异(p>0.05);34例P一gP阳性患者中，应用不同剂量化疗药物，疗效无显著差别(尸>0.05);13例P一gP阴性患者中，应用不同剂量化疗药物，常规剂量组有效率高于半剂量组，但无显著差异(尸>0.05)。 3 .VXZ肿瘤传代兔化疗后，将肿瘤组织悬液注人兔大腿内侧肌肉再次传代，传代后瘤组织生长速度无明显变化。 4 .25只模型兔肝脏内肿瘤接种全部成功。三周后行增强CT检查，肿瘤无强化，边缘光整，与正常肝组织分界清楚，各组之间肿瘤大小无明显差异。经肝动脉注人阿霉素、生理盐水和阿霉素加异搏定一周后行增强CT检查，各组肿瘤体积均增大。比较各组肿瘤倍增率，A组显著低于其它组(尸<0.05);C组肿瘤倍增率低于B、D两组，但各组之间无显著差异(尸>0.05);E组肿瘤倍增率低于C、D两组，但无显著差异(尸>0.05)。 5.形态学改变:传代后，经过耐药诱导的VXZ肿瘤与常规传代肿瘤组织在形态上无明显区别。 6.肿瘤凋亡:流式细胞仪检测各组肿瘤凋亡率，其中A组高于B、C、D三组，并存在显著差异(尸<0.05)。C组高于B、D两组，但各组间无显著差异(尸>0.05);应用异搏定加阿霉素的E组肿瘤凋亡率高于C、D二组，但是，各组间无显著差异(尸>0.05)。结论 1.多药耐药是影响肝动脉化疗栓塞术疗效的重要因素，治疗前检测P一gP表达对制定个体化治疗方案有重要意义;减少P一gP阳性肝癌患者中化疗药物用量不影响介人治疗疗效;在P一gP阴性