白菜类作物开花时间相关基因BraA.FLM.a的表达分析及CAPS标记开发

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适当的开花时间对于植物成功繁衍后代是至关重要的。在感知并整合内源信号和环境信号的过程中涉及到复杂的调控因素,如内源激素、光周期、环境温度等。在拟南芥上,FLM是环境温度通路中调控开花的关键基因,FLM的两个主要的剪接变体FLM-β和FLM-δ可以竞争性的和开花抑制因子SVP结合。SVP-FLM-β复合物主要在低温下形成来抑制早开花,而SVP-FLM-δ结合物在高温条件下结合DNA时受损从而间接地促进FT和SOC1的表达而促进开花。白菜类作物(Brassica rapa)主要包括大白菜(B.rapassp.pekinensis)、菜心(B.rapassp.parachinensis)、不结球白菜(B.rapa ssp.chinensis)、芜菁(B.rapassp.rapa)和油用类型(B.rapassp.oleifera),属于芸薹属(Brassica)重要经济类型作物。本研究主要利用测序、组织表达、亚细胞定位和CAPS标记分析五个不同温度(16、20、24、28和32℃)处理四种代表性的白菜类作物(菜心、大白菜、油莱和不结球白菜)的基因BraA.FLM.a和相关开花基因。研究结果如下:1.四份材料在五个温度处理下的开花时间有所不同,尤其在CX-5上,28℃和32℃条件下可以使其早开花。在16℃处理后7天的CX-58和YS-143中扩增出BraA.FLM.a的四种选择性剪接SPD1、SPD2、SPD3和SPD4。通过幼嫩叶的组织表达分析,结果表明从16℃到32℃温度变化范围内,其四种选择性剪接模式在CX-58、CC-94和YS-143表达水平随着温度的升高而增加。而在PC-Glu材料上,SPDs的表达模式是有所不同,SPDs的转录水平在24℃后才开始随着温度的增加而增加,直到28℃时达到最高,之后稳定不变。进一步分析了开花时间与四种选择性剪接的相关性。BraA.FLM.a的四种选择性剪接与 CX-58(r=0.50-0.68,p≤0.01)和 YS-143(r=0.38-0.68,p≤0.01)的开花时间显著性相关。更进一步分析了 SPD1/SPD4与开花时间的相关性结果显示仅仅CX-58(r=0.814,p≤0.05)和 YS-143(r=0.959,p≤0.01)的开花时间与 SPD1/SPD4 显著性相关,CC-94和PC-Glu的开花时间与SPD1/SPD4并无显著性相关。故BraA.FLM.a的选择性剪接与白菜类作物开花时间相关。对于CX-58来说,SPD1主要在低温条件下起作用而SPD4可能在高温条件下起主要作用。亚细胞定位显示不同的选择性剪接其蛋白的位置也有所不同。2.通过调查亲本早开花油用型Yellow sarson和晚开花芜菁vegetableturnip的开花时间和F2群体的开花时间,发现两亲本的开花时间存在显著性差异。在突变位点T-A处开发出了 CAPS标记BraA.FLM.a-NlaⅢ。在136份F2分离群体上进行此CAPS标记的验证后,发现BraA.FLM.a基因的CAPS标记BraA.FLM.a-NlaⅢ与开花时间表型显著相关;该标记可以用作开花时间的分子选择辅助育种。
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