目的当今革兰阴性细菌的耐药已朝多重耐药和广谱耐药发展,携带mcr-1及blaNDM基因的菌株种类和数量日趋增多。本研究对2010年-2019年间从中国14个省份的病人、家畜家禽、环境及野生动物标本中分离到的革兰阴性菌进行筛选,研究mcr-1和blaNDM基因的携带、分布及耐药情况等。方法本研究对2010年-2019年间从中国14个省收集到的野生动物、病人、家畜家禽及环境标本中分离筛选出的12858株革兰阴性细菌,使用API 20E板条(bioMerieux,France)或 VITEK Ⅱ 系统(bioMerieux,France)进行细菌种属鉴定。通过PCR对筛选出的12858株革兰阴性细菌进行mcr-1基因和blaNDM基因的初筛检测,携带耐药基因的阳性菌株再经PCR及测序得到耐药基因的开放阅读框。采用微量肉汤稀释法测定阳性菌株对多粘菌素类、碳青霉烯类及临床常见抗菌药物的最小抑菌浓度(MICs)。结果从≥118个种12858株革兰阴性细菌中筛选出携带mcr-1基因的菌株共10个种70株:36株分离自病人(0.62%,36/5828),29株分离自家畜家禽(4.07%,29/712),5株分离自环境(5.43%,5/92);3个种共6株携带blaNDM基因,全部分离自病人标本,阳性率0.10%(6/5828);无人区的野生动物标本共分离到的6226株菌中未发现携带mcr-1或blaNDM基因。同时发现2个新的mcr-1基因变种:与mcr-1相比,mcr-1.21(genbank:MK965883)在开放阅读框第1234bp处碱基由C变为T,密码子由脯氨酸变丝氨酸,多粘菌素耐药表型未发生变化;另1株mcr变种(genbank:MK965884)在开放阅读框第1344bp处碱基由G变为A,密码子由色氨酸变为终止密码子,耐药表型为对多粘菌素敏感。对多粘菌素类及碳青霉烯类抗生素的药敏结果显示:携带mcr-1基因的菌株中,66株对多粘菌素耐药、4株对多粘菌素敏感,全部70株均对碳青霉烯类抗生素敏感;携带blaNDM基因的6株菌对碳青霉烯类抗生素有不同程度耐药,对多粘菌素类抗生素均敏感。对其他临床常见的抗生素的耐药结果显示:携带mcr-1基因的菌株同时也对四环素类、青霉素类、喹诺酮、磺胺类、某些头孢类及氨基糖苷类的抗生素有较高程度的耐药,仅对头孢类的某些药物有一定的敏感性;携带blNDM基因的菌株对除多粘菌素类的抗生素均耐药。结论本研究表明,中国2010年-2019年年间的野生动物中未发现携带mcr-1或blaNDM基因菌株,病人、家畜家禽及环境分离株中携带两类基因的菌种较为有限,多为正常菌群、条件致病菌及某些低致病性细菌。这些发现说明,多粘菌素类与碳青霉烯类耐药菌株的出现及增多主要与抗生素选择性压力有关,mcr-1或blaNDM基因在细菌间的转移范围相对局限。