论文部分内容阅读
近年,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)呈现低龄化发展和患病率升高的趋势,且NAFLD发病机制复杂多样,目前普遍认为,NAFLD的发生与胰岛素抵抗、肥胖和血脂异常等因素有关。临床研究表明,抗凝疗法可以改善NAFLD,而凝血噁烷A2(TXA2)通路与脂类物质花生四烯酸的代谢有关,大豆提取物金雀异黄酮具有降低血脂的作用,所以本研究用金雀异黄酮干预高脂饮食诱导的NAFLD小鼠,探究金雀异黄酮对NAFLD的预防作用和其对TXA2通路的影响以及可能作用机制。主要研究内容如下:首先,研究金雀异黄酮对小鼠NAFLD的预防作用。将4周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机分为5组:正常对照组(Normal Control,NC)、高脂对照组(High Fat Diet,HFD)、低剂量金雀异黄酮组(Low Dose Genistein,LGEN)、高剂量金雀异黄酮组(High Dose Genistein,HGEN)、阿司匹林阳性对照组(Aspisin,ASA)。研究金雀异黄酮对小鼠体重、血糖、基础代谢指标以及血脂指标等的影响。结果发现,与HFD组相比,金雀异黄酮可以降低小鼠体重,改善胰岛素抵抗与葡萄糖耐受,降低肝重、肝重指数、附睾白色脂肪重,降低高脂饮食小鼠血浆中TG、TC、ALT、AST、LDL-C以及前列腺素系列指标的水平。肝脏切片HE染色显示,干预组小鼠未见明显的脂肪变性与脂滴聚集,肝细胞排列整齐。血浆和肝脏中的TNF-α水平显著下降。HFD组小鼠肝脏中凝血噁烷受体(TBXA2R)显著增加。然后,研究金雀异黄酮对TNF-α诱导的人肝癌细胞(Hep-G2)胰岛素抵抗的改善作用。测定金雀异黄酮对Hep-G2细胞的毒性,并进行预处理后诱导体外胰岛素抵抗模型,使用WB法测定细胞中磷酸化的胰岛素受体(P-IR)和胰岛素受体底物(P-IRS1)表达量的变化。结果发现,与模型组细胞相比,金雀异黄酮可以上调Hep-G2细胞中PIR和P-IRS1蛋白的表达量,改善细胞的胰岛素抵抗。最后,探究金雀异黄酮改善胰岛素抵抗的作用靶点。将Hep-G2细胞进行转染,沉默TBXA2R基因后,以SQ29548为阳性对照物,I-BOP为阴性对照物,用金雀异黄酮预处理后,诱导胰岛素抵抗模型。结果发现,当Hep-G2细胞中TBXA2R基因沉默后,金雀异黄酮不能改善其由TNF-α诱导的胰岛素抵抗。细胞中P-IR和P-IRS1蛋白的表达量与细胞消耗葡萄糖量的检测结果一致。综合分析金雀异黄酮对小鼠NAFLD的预防作用和对Hep-G2细胞胰岛素抵抗的改善作用,发现金雀异黄酮可以通过调节花生四烯酸的代谢,作用于TXA2通路,改善胰岛素抵抗,进而预防高脂饮食诱导的NAFLD的发生。