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目的:通过观察续筋接骨片对骨折大鼠促成骨作用,以及对骨痂组织中BMP-2/Smad通路与TGF-β/SMAD通路活化的影响,探讨续筋接骨片通过调控TGF-β超家族发挥促成骨作用机制。材料与方法:50只SD大鼠适应性饲养1周后,按照随机数字表法将大鼠随机分为两组:空白组、模型对照组、仙灵骨葆组、续筋接骨片高剂量组、续筋接骨片低剂量组,每组10只。采用手术的方法(假手术组大鼠实施手术,但不造成骨折)对模型对照组、续筋接骨片高剂量组、续筋接骨片低剂量组、仙灵骨葆组大鼠进行骨折模型复制。术后第5天开始给予相应药物干预,每日一次,连续三周。末次给药后1小时,所有组别采集全血,分离血清,检测血清中Ca、P、ALP、BGP含量。剥离骨干上附着的骨痂组织,用于western-blot法检测骨痂组织中SMAD1/5、SMAD6的表达。剩余股骨组织浸泡于4%多聚甲醛溶液中,常温固定,用于股骨组织HE染色和免疫组织化学法检测骨痂组织中TGF-β、BMP-2的表达。结果:1.各组大鼠血清中Ca、P含量检测结果显示:与假手术组比较,其余各组大鼠血清中钙磷含量均显著降低,有显著的统计学意义(p<0.01);与模型对照组比较,续筋接骨片高剂量组和仙灵骨葆组血清钙磷含量均显著升高,而续筋接骨片低剂量组血磷含量也显著升高,有显著的统计学意义(p<0.01);与续筋接骨片高剂量组比较,续筋接骨片低剂量组血清钙磷含量显著降低,而仙灵骨葆组血清磷含量也显著降低,有显著的统计学意义(p<0.05或0.01)。2.各组大鼠血清中ALP、BGP检测结果显示:与假手术组比较,其余各组大鼠血清中ALP、BGP含量显著降低,有显著的统计学意义(p<0.01);与模型对照组比较,各药物干预组大鼠血清中ALP、BGP含量显著升高,有显著的统计学意义(p<0.01);与续筋接骨片高剂量组比较,续筋接骨片低剂量组血清ALP、BGP含量及仙灵骨葆组大鼠血清BGP含量均显著降低,有显著的统计学意义(p<0.01或0.05);与续筋接骨片低剂量组比较,仙灵骨葆组大鼠血清BGP含量显著升高,有显著的统计学意义(p<0.05)。3.各组大鼠股骨组织病理切片镜下显示:假手术组大鼠股骨镜下可见骨组织结构清晰,骨板结构正常,未见异常改变。模型对照组大鼠骨组织破损,骨板不完整,可见大量炎性细胞浸润,成骨细胞较多,偶见破骨细胞。续筋接骨片高、低剂量组及仙灵骨葆组大鼠病理改变明显轻于模型对照组,炎性细胞显著减少,可见大量成骨细胞及破骨细胞。4.各组大鼠骨痂组织中SMAD1/5、SMAD6表达水平检测结果显示:SMAD1/5蛋白发光后分别在120 kDa和58 kDa处出现条带。SMAD6蛋白在54 kDa处出现条带。与假手术组比较,其余各组骨痂组织中SMAD1/5蛋白表达水平显著降低,而SMAD6蛋白蛋白表达水平显著升高,有统计学差异(p<0.01);与模型对照组比较,各药物干预组大鼠骨痂组织中SMAD1/5蛋白表达水平显著升高,而SMAD6蛋白蛋白表达水平显著降低,有统计学差异(p<0.01);与续筋接骨片高剂量组比较,续筋接骨片低剂量组和仙灵骨葆组大鼠骨痂组织中SMAD1/5蛋白表达水平显著降低,而SMAD6蛋白蛋白表达水平显著升高,有统计学差异(p<0.01);与续筋接骨片低剂量组比较,仙灵骨葆组大鼠骨痂组织中SMAD1/5蛋白表达水平显著升高,而SMAD6蛋白蛋白表达水平显著降低,有统计学差异(p<0.01)。结论:1.续筋接骨片对骨折大鼠具有较好的促愈合作用,能够明显升高骨折大鼠血清中钙、磷、碱性磷酸酶及骨钙素含量。减轻骨折大鼠骨痂组织中炎症浸润状态,增加成骨细胞等。2.续筋接骨片对骨折大鼠的促进骨形成作用可能是通过促进TGF-β/Smad、BMP/Smad信号通路的活化而实现的。其核心机制可能是续筋接骨片对TGF-β超家族具有调控作用