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细胞牵引力(Cell Traction Force):是细胞作用于细胞外基质的力,它是一个重要的物理参数,涉及许多复杂的信号转导通路,对细胞的增殖、分化、信号转导、迁移、凋亡具有重要的调节作用,与诸多严重疾病的发生发展密切相关。肿瘤细胞与正常细胞相比,其特性表现出许多差异,目前关于此方面的报道还不多见。因此,本试验对小鼠胃肿瘤细胞在诱导分化前后的力学特性变化进行了比较研究,试图探索细胞牵引力在癌变的过程中的变化机制。方法与结论如下:1.小鼠正常胃细胞与胃肿瘤细胞的培养。从小鼠体内分离正常胃组织,采用消化法获取小鼠胃细胞,置于CO2培养箱中培养。培养3~4天后用倒置显微镜观察细胞生长状态,并更换培养液,弃去未贴壁的细胞。待细胞形成较好的细胞集落时扩大培养,每隔3d传代。选取生长情况较好的细胞制成细胞爬片,其余细胞继续培养。小鼠胃肿瘤细胞在体内建模后,采用消化法获取肿瘤细胞,同样置于CO2培养箱中培养。根据长势情况每隔3d进行传代,根据试验需求制备相应的细胞爬片,其余细胞继续培养备用。2.鬼笔环肽染色对微丝的特异性染色。利用鬼笔环肽可与微丝特异性结合的特点,对细胞骨架中的微丝进行标记,以观察小鼠胃肿瘤细胞诱导分化前后细胞内微丝分布形态的变化。结果显示诱导分化前的小鼠胃肿瘤细胞微丝较为稀疏,呈不规则的分布方式,相互交织成网状,并且处于一种扭曲和包含能量的状态,而经过诱导分化后的细胞微丝较为密集,扭曲消失,排列有序,能量得到释放。这表明细胞癌变以后,细胞骨架发生了较大的改变。3. α-SMA蛋白的检测。利用荧光抗体染色技术以及蛋白质印迹法检测了小鼠胃肿瘤细胞诱导分化前后α-平滑肌肌动蛋白含量的变化,以小鼠正常胃细胞作为参考。结果发现,诱导分化前的小鼠胃肿瘤细胞中α-SMA蛋白表达含量较低,并且相对松散。而诱导分化后的α-SMA蛋白表达含量较高,并且相对密集,其含量更加接近小鼠正常胃细胞的α-SMA蛋白的表达量。4.细胞牵引力的测定。利用CTFM(Cell Traction Force Microscopy)法,即显微镜追踪法测量细胞牵引力。结果显示:小鼠胃肿瘤细胞诱导分化前后的牵引力变化十分显著,均方根值由279pa增加到565pa,增大了一倍左右。细胞投影面积的平均值也相应增大,由690um2增加到963um2,大约增加了39.6%。小鼠胃肿瘤细胞的最大牵引力由1400pa增加到1800pa。细胞在基质上留下的位移变化也是很显著,最大值由原来的2.2um上升到了2.5um。