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利用Illumina Solexa MPSS测序法对人类正常肝及肝癌组织样品进行深度测序,从miRNA组的整体角度入手,分析了正常肝脏miRNA组的表达模式,试图寻找在肝细胞癌(HCC, hepatocellular carcinoma)发生发展过程中发生变化的重要的miRNA.我们发现microRNA-93(miR-93)在正常肝组织中表达丰富,在HCC组织中的表达量较正常肝组织却显著升高。越来越多的证据表明miRNA在HCC的发生发展中起着重要的作用,然而miR-93在HCC中上调的病理意义还没有得到揭示。在本研究中,我们发现miR-93的表达量在HCC组织和HCC细胞系中都显著升高,统计分析表明HCC组织中较高的miR-93表达水平与HCC患者较短的总体生存率(OS, overall survival)、无瘤生存率(DFS, disease free survival)以及较高的复发率显著相关,miR-93被确定为可以判断HCC患者预后的一个独立预测指标。为了确定miR-93在HCC中上调中的生物学意义,我们进行了体内和体外研究。体外实验中,在HCC细胞系中感染表达miR-93的慢病毒(Lenti-miR-93)而重建miR-93的表达,能显著促进HCC细胞的细胞增殖、克隆形成能力,迁移及侵袭能力。相反,感染Lenti-anti-miR-93而达到抑制miR-93的表达后,表现出细胞增殖侵袭能力受到显著抑制。体内实验中,通过给裸鼠皮下注射稳定感染Lenti-miR-93、 Lenti-anti-miR-93以及相应对照HCC肿瘤细胞构建成瘤模型,调高miR-93的表达后瘤体生长速度以及体积显著高于miR-93抑制组,反之则起到对肿瘤生长的抑制作用。通过报告基因筛选和western blot验证,酪氨酸蛋白激酶受体A4(EphA4, Ephrin type-A receptor4)被确定为miR-93的靶基因。进一步实验发现高表达EphA4后可以抑制细胞的增值以及转移,而抑制EphA4后可以模拟miR-93的促肿瘤细胞生长作用。我们进一步研究发现,这些肿瘤细胞恶性表型改变过程中,上皮细胞间变(EMT, epithelial to mesenchymal transition)参与了其中,我们检测到这一过程中E-cadherin、Vimentin、β-catenin以及Claudin等关键信号分子的表达变化。综上所述,在HCC组织中miR-93的表达显著上调,并且miR-93表达上调与HCC肝移植患者预后较差相关,miR-93可以作为HCC肝移植术后诊断预后的一个潜在的预测靶标。由于miR-93是通过EphA4介导的EMT转变促进HCC生长恶变,提示miR-93在HCC治疗中具有潜在的应用价值。