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目的: 探讨谷氨酸(glutamate, Glu)诱导小鼠海马系HT-22 细胞产生的神经兴奋性毒性作用,以及多聚ADP 核糖聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]抑制剂PJ34[N-(6-oxo-5,6-dihydrophenanthlidin-2-yl) -N,N-dimethylaeetamide·HCI]对谷氨酸诱导的神经毒性的保护作用及其机制,并为研发有效的神经系统疾病治疗药物提供实验基础,也为PJ34 在缺血性脑血管病的临床应用方面提供了借鉴。
方法: 将培养后的HT-22 细胞分为Glu 组、PJ34 组、对照组、空白组4 组。
Glu 组、PJ34 组分别用5 mmol/L Glu 诱导处理HT-22 细胞,构建神经细胞的损伤模型,PJ34 组随后给予50μmol/L PARP 的特效抑制剂PJ34 进行保护处理。继续培养12、24 和48h 后,分别采用MTT 法检测各组的细胞活力和细胞抑制率;透射电镜观察各组细胞超微结构变化;PAR 免疫荧光染色和Western Blot 方法观察PARP 活性改变,Western Blot 方法检测AIF 的核转位情况。
结果:
1、MTT 法检测Glu 组培养12 h 后HT-22 细胞抑制率较对照组明显升高,PJ34+Glu 组较Glu 组明显下降;PJ34+Glu 组细胞活力较Glu 组显著增高(P<0.05)
2、透射电镜观察结果表明:Glu 组细胞培养12h 后核膜形态发生改变,核固缩,空泡样疏松化,粗面内质网囊泡和线粒体肿胀;PJ34+ Glu 组各时间点细胞形态基本完整,核膜无增厚,线粒体有稍许肿胀和扩张,有时可见胞质内出现空泡;
3、Glu 组培养12 h PAR 荧光亮度明显强于对照组和PJ34+Glu 组;4、WesternBlot 法检测示:Glu 组各时间点PARP 活性较对照组和PJ34+Glu 组均显著增高(P<0.05),Glu 组各时间点核内AIF 蛋白的表达量较对照组和PJ34+Glu 组均显著增高(P<0.05)。
结论:
1、谷氨酸降低HT-22 细胞的细胞存活率,改变细胞超微结构,引起PARP过度活化,增加AIF 核移位。
2、PJ34 通过降低PARP 活性,抑制AIF 的核移位,增加谷氨酸诱导的HT-22 细胞的存活率,减轻细胞超微结构改变,从而起到保护作用。