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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)是造成断奶仔猪多系统衰竭综合症(Postweanig multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原,也可导致免疫抑制,引起其它相关疾病的并发和继发感染,给养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫接种是预防PCV-2的主要措施,免疫猪群中仍会存在野毒感染的猪。要将其从免疫猪群中淘汰,必须要建立能大规模鉴别野毒感染的方法。本研究的目的就是建立检测PCV-2野毒感染抗体的ELISA方法。为鉴定PCV-2 ORF3蛋白的抗原性,本实验首先将ORF3基因插入pT7-IRES表达载体,使用体外无细胞蛋白合成系统进行蛋白表达,用PCV-2野毒感染猪的血清对表达蛋白的抗原性进行Western-blot鉴定。为获得大量的表达蛋白进行纯化和ELISA方法的建立,将其插入pET-28a表达载体构建重组表达质粒,鉴定后进行纯化,随后用其作为包被抗原建立间接ELISA,并对临床野毒感染样品进行了检测。试验结果表明,PCV-2 ORF3基因被插入pT7-IRES表达载体,构建成功pT7-PCV-2-ORF3表达质粒,使用体外无细胞蛋白合成系统可特异性的表达出ORF3蛋白,在Western-blot试验中,表达蛋白可与PCV-2野毒感染的猪血清进行特异性反应,表明ORF3蛋白和刺激机体产生抗体并与抗体发生特异性反应。为获得大量的重组表达蛋白进行纯化,又将ORF3基因插入pET-28a原核表达载体成功构建了pET-PCV-2-ORF3原核表达质粒,转化BL21(DE3)大肠杆菌后可高效的诱导表达。Western-blot试验表明表达蛋白可与6XHis单克隆抗体发生反应,也与野毒感染的猪血清发生反应,但与PCV-2 CAP蛋白重组疫苗免疫小鼠的血清不能发生反应。将原核表达的ORF3蛋白亲和层析纯化后,作为抗原包被ELISA板,初步建立了间接ELISA方法,对40份临床阴阳性血清的检测结果表明,其能从26份阳性血清中检出24份为阳性,阳性符合率为92%,具有很高的符合率。本研究表明PCV-2 ORF3具有良好的免疫原性,用其作为抗原建立的ELISA可用来进行PCV-2野毒感染的检测,结合使用重组蛋白疫苗,可更好地进行该病的预防、控制和净化。