FHL2蛋白在牙周膜细胞矿化过程中表达的实验研究

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目的:人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs)作为牙周组织中的主要的功能细胞,具有多向分化潜能,包括向成骨细胞、成牙骨质细胞及成纤维细胞分化潜能。研究表明许多因子及小分子蛋白能够调控牙周膜的分化过程,在创伤修复和组织再生中发挥重要作用。FHL2属于LIM蛋白超家族下LIM-only亚类。其中人FHL类蛋白分子结构中仅含有4个半LIM域,而FHL2是该类研究最深入的成员。目前已知在成骨细胞中FHL2有高表达,尤其是在骨髓细胞向成骨细胞分化时表达量可增加3倍。研究证明FHL2可提高转录因子Runx2的转录活性,而Runx2是调节成骨细胞功能的一个关键的因子。因此我们推测FHL2蛋白可能在牙周组织再生中发挥一定作用。但目前尚未见关于FHL2对牙周膜分化影响的报道。本研究在体外培养人牙周膜细胞的基础上,观察胞内信号转导分子FHL2蛋白在人牙周膜细胞体外矿化过程中的表达,初步探讨其在牙周组织再生中可能的作用。方法:牙周膜细胞来自因正畸需要而拔除的健康前磨牙。利用组织块法体外培养人牙周膜细胞。取4-6代细胞用于实验。实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。1.矿化培养0d、14d、28d后,茜素红染色检测矿化结节的形成;免疫细胞化学法检测蛋白水平上FHL2的表达;2.同时采用半定量RT-PCR技术检测矿化0d、14d、28d FHL2 mRNA的表达。SPSS11.0软件分析结果。结果:1.牙周膜细胞培养14天开始,矿化组茜素红染色阳性,矿化结节形成;未矿化组茜素红染色阴性。2.免疫细胞化学结果显示牙周膜细胞矿化诱导培养14天后FHL2蛋白呈强阳性表达,对照组为相对较弱的阳性表达。3. RT-PCR显示牙周膜细胞矿化诱导0、14、28天相比,均有FHL2 mRNA的表达,其中14天时表达最高,约为0天时的1.4倍,且有统计学意义(P<0.01)。结论:首次发现FHL2与人牙周膜细胞的体外矿化过程相关。提示FHL2可能在牙周膜细胞的分化、矿化过程中发挥作用。
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