丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒引起的非甲、非乙型肝炎,是引起肝癌与肝硬化的主要原因之一。据世卫组织不完全统计,全球大约有1.7-2亿人感染丙肝病毒,我国属于丙肝高感染区,大约有4300万人感染了丙肝病毒。一直以来,缺乏合适的丙肝病毒感染模型严重影响着治疗药物及疫苗的研发进程。现今主要的治疗方式为干扰素与利巴韦林联合用药,但治疗效果由于基因型的不同而存在部分差异。近年来,虽然建立了HCV感染的细胞培养模型,但也仅局限于部分基因型。随着huh7.5.1细胞-病毒培养模型的建立,使得感染型小动物模型的建立尤为紧迫。目前除人和黑猩猩可以自然感染丙肝病毒外,并未发现新的可自然感染的小动物。小鼠是与人类亲缘关系差距较大的动物,病毒感染后的病理变化机制也存在较大差异,很难用于丙肝动物模型研究。树鼩由于其生长繁殖快、价格低、易于饲养及新陈代谢等生理学特点与人类似,以被广泛的应用于人类相关疾病的研究。很多研究已发现,树鼩可以被丙肝病毒感染,具有发展为理想动物模型的潜力。但由于树鼩来源及种系差别大、遗传不稳定等宿主因素,致使树鼩对HCV感染具有不确定性,且不同研究发现的感染与致病现象也不尽相同。丙肝病毒是一种RNA病毒,由于缺乏RNA聚合酶的矫正功能及存在机体的免疫选择压力,在病毒感染过程中,病毒基因组会随之发生突变。在HCV基因组中,E2/NS1区中的27个氨基酸变异最明显,因而此区被称为高变区1(hypervariableregion1, HVR1)。此高变区含有抗原表位,与体液免疫及细胞免疫有重要联系。对于高变区序列的研究有利于我们了解病毒与宿主的关系,在后续的治疗药物效果评价及免疫预防等方面具有重要的意义。本研究以驯化的树鼩为研究对象,采用已优化好的分离及培养条件得到生长状态良好的树鼩原代肝细胞。在分离培养细胞的同时,利用本实验室病毒培养方法在huh7.5.1细胞培养出病毒载量为108copies/mL的病毒。将病毒与原代肝细胞共培养,定期收取培养上清及细胞。通过逆转录-巢式PCR检测,上清中有病毒RNA的存在。荧光定量PCR检测发现,PTH上清中病毒载量最高达到6×104copies/mL。利用Western blot检测PTH细胞中HCV NS3蛋白的表达情况,在感染前九天并未发现HCV NS3蛋白的表达,感染后11天和13天可检测到蛋白表达。从分子及蛋白水平证实HCV可以感染树鼩肝细胞并在其中复制及装配,但由于宿主个体及病毒批次的不同致使感染很不稳定。其次,将树鼩采取单笼单养模式进行树鼩驯化饲养,待树鼩适应环境后,进行树鼩病毒的感染性实验。通过尾静脉注射和肝脏多点注射等方式进行病毒接种,在一星期之后,对树鼩进步加强感染。定期进行抽血,每次抽血约800μL,将获得血清分装。一部分血清用于生化指标(ALT, AST)检测,一部分血清用于RNA的提取并进行定性及定量检测,来确定是否有病毒RNA的存在。ALT及AST整体处于20～50的正常范围,通过逆转录-巢式PCR检测发现,实验组B2、B5、B6、B9及H8树鼩感染时间出现间歇性感染现象,十六周之后全为阴性,H2与H5两只能在第一周和第二周检测HCVRNA阳性,之后转为阴性,但在感染16周后所有感染组并未检测到病毒的存在,检测阳性的病毒载量最高仅达到4×103copies/mL,病毒载量较低。结果初步证实,树鼩可以被HCV感染,由于个体遗传及免疫差异致使感染效率不一样。最后,选取体内及体外检测阳性的实验组,提取总RNA,然后通过巢式PCR扩增出含有HVR1区的目的片段,通过胶回收纯化目的片段,送与公司测序。发现,高变区1中1490、1511、1530、1532、1554位核苷酸有突变现象产生,27个氨基酸中384、391、392、397、398、405位氨基酸也出现对应的突变。结果显示,不同实验组的HVR1区存在不同程度的变异,这可能是由于在机体的免疫选择压力而产生的突变。综上,我们通过实验研究发现树鼩个体和树鼩肝细胞均可被HCV感染,在高变区1有突变现象产生。尽管总体感染率较低,但结果显示树鼩可作为潜在的HCV感染动物模型,用于后续研究。