脆江蓠生理生化特性及组织培养种质保存研究

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jianjian1985
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脆江蓠(Gracilaria chouae Zhang et Xia)是我国特有的大型经济红藻,已在福建沿海开展了大规模人工栽培,具有巨大的经济价值和生态价值。但其基础生物学研究较为欠缺,且孢子采苗困难,养殖主要依靠藻枝累代营养繁殖,不利于养殖规模的扩大和种质资源的保存。这些问题严重制约了脆江蓠养殖业的健康持续发展。为补充脆江蓠基础生物学研究的不足,探索经济、高效的保种和育苗的新途径,本研究在实验室条件下对脆江蓠进行生理学实验,探究脆江蓠生长的适宜光强和温度条件,并应用植物组织培养技术,从藻体的无菌化处理、理化条件的优化、丝状体的诱导、保存及再分化等方面对脆江蓠无性繁殖系的诱导和育苗进行了探索,主要研究方法及结果如下:1.为探究脆江蓠生长的适宜光强和温度条件,设置10、15、20、25℃4个温度梯度和40、80、120、160、200μmol·m-2·s-15个光强梯度,对脆江蓠进行二因素多水平室内培养实验。结果表明:温度、光强及二者交互作用均对脆江蓠的生长产生极显著影响,温度为相对生长速率的主要影响因子。在光强120μmol·m-2·s-1,温度20℃条件下,脆江蓠相对生长速率最高,达0.038g·g-1·d-1。光合色素含量随温度升高而升高,随光强增大先升后降,在光强120μmol·m-2·s-1,温度25℃条件下达到最高值,藻红蛋白(PE)达1.12mg/g,藻蓝蛋白(PC)达0.272mg/g,别藻蓝蛋白(APC)达0.216mg/g1,叶绿素a (Chla)达1.82mg/g,其中光强对PE、Chla含量的影响较大,温度对PC、APC含量的影响较大。超氧化物歧化酶(SOD)含量随温度的降低和光强的升高而升高,主要受光照强度影响。在各温度条件下,120~200μmol·m-2·s-1光强组SOD含量较高,均达到800U/g左右的较高水平。丙二醛(MDA)含量随温度和光强的上升均呈先上升后下降的趋势,主要受温度影响。25℃、200μmol·m-2·s-1处理组MDA含量最高,达211.85mg/gFW。综上,脆江蓠生长最适条件为光强120μmol·m-2·s-1,温度20℃;在25℃高温下脆江蓠细胞受害程度较高,在40~120μmol·m-2·s-1光强范围内,提高光照强度可提高脆江蓠的抗逆性。2.为诱导脆江蓠产生丝状体,并找到适宜的脆江蓠组织块除菌方法及丝状体诱导的适宜条件,本实验设置了不同的灭菌方法、外植体长度、光强、温度、培养基及生长调节剂等条件,对脆江蓠藻段进行组织培养,结果表明:最佳灭菌方法是将脆江蓠藻体用无菌海水冲洗干净,在20℃下超声清洗15min,放入1%聚维酮碘溶液中浸泡5min后洗净藻体表面的灭菌剂,在含抗生素的f/2培养基中培养24h,该处理在有效除菌的同时,可最大程度的减轻对外植体的伤害,提高成活率;组织培养适宜的藻段长度为10mm,该长度的外植体成活率达到100%,98%的外植体产生不定芽,平均出芽数为3.29±1.67个/cm;适宜的光温条件为,温度20~25℃、光强40~120μmol·m-2·s-1,该条件下愈伤组织诱导率均达70%以上,不定芽产生率达95%以上;在培养基中添加0.5mg/L1-萘乙酸对丝状体的诱导和不定芽产生均有明显效果,75%以上的外植体产生丝状体,而对照组无丝状体的产生,添加1-萘乙酸组的外植体不定芽的芽长也显著高于对照组。3.分别采用液体培养基和固-液结合培养基对脆江蓠丝状体进行培养,并设置不同温度、光强条件,观察其生长情况。结果表明:脆江蓠丝状体与外植体分离后,在液体培养基中悬浮培养仍可保持快速营养生长,生长的适宜温度为20~25℃,适宜光强为80~120μmol·m-2·s-1,最大相对生长速率达到0.10g.g-1. d-1。4.将脆江蓠丝状体片段静置培养,与附着基接触的丝状体可自行固着并再分化为盘状体,经过40天室内培养,再生出脆江蓠幼苗。
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