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目的:肝细胞生长因子(HGF)即扩散因子(SF)是一种多肽生长因子,首先从部分肝脏切除大鼠的血清中提取。由于其对肝细胞具有强的丝裂原作用,因此命名为肝细胞生长因子。最初它仅仅被认为是肝细胞增殖的丝裂原之一,以后逐渐发现其具有促进肿瘤进展的多种功能,它是一种血管生成的强大诱导剂,可诱发内皮细胞增殖和迁移,刺激体内新生血管的生成。HGF对癌细胞具有促分裂、诱导肿瘤细胞迁移、侵袭以及诱发肿瘤血管生成的作用。对前列腺癌等多种肿瘤的失控性生长发挥重要的作用。HGF生物学活性是由原癌基因c-met编码的跨膜受体蛋白所介导,c-met是一种原癌基因,属跨膜蛋白,是唯一已知的HGF/SF的高亲和力受体。
c-met在多种组织和细胞中都有表达。已知它在肝细胞、脾、肾、造血细胞、肝细胞癌、胃癌、结肠癌、肺癌、甲状腺癌等组织中都可以表达。在正常组织中,c-met的mRNA浓度很低甚或检测不到,但其对应的癌组织则有很高的表达。HGF与c-met结合后,受体发生自身磷酸化,由此激活受体的内在酪氨酸激酶活性,进而引起细胞内一系列信号转导途径的级联激活,从而调节细胞的增殖、分化、运动和血管生成等。人体多数实体肿瘤由于生长速度较快,造成瘤体严重缺氧,供氧和耗氧不平衡。低氧会引起肿瘤细胞多种基因的表达,然而低氧是否会使前列腺癌细胞中c-met表达增多尚不明确。本实验旨在明确低氧与c-met过度表达的相关性,探讨低氧对前列腺癌DU145细胞c-met表达及侵袭力的影响。
方法:将DU145细胞分为常氧组和低氧组,分别置于常氧(37℃,5%CO2,20%O2)和低氧(37℃,5%CO2,1%O2)条件下培养6h、12h、24h、36h,采用Western blot及RT-PCR技术分别检测c-met蛋白及mRNA相对表达量,采用Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭力。
结果:常氧及低氧6h、12h、24h、36h状态下DU145细胞c-met蛋白及mRNA的相对表达量依次升高,常氧组与低氧6、12、24、36h组c-met mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义;常氧组与低氧6h组c-met蛋白的相对表达量比较差异有统计学意义,常氧组与低氧12h、24h、36h组c-met蛋白的相对表达量比较差异有统计学意义;在低氧6-36h期间,c-met蛋白及mRNA的相对表达量组间比较差异有统计学意义;低氧6h、12h、24h、36h组侵袭细胞数比常氧组明显增多,差异有统计学意义,而且随着低氧时间延长,侵袭细胞数逐渐增多,组间比较差异有统计学意义;c-met蛋白表达的变化与细胞侵袭力的变化呈正相关。
结论:低氧环境可使DU145细胞c-met的蛋白及mRNA表达明显增加,使该细胞的侵袭力增强,其侵袭力的增强可能与c-met表达水平增高有密切关系。