论文部分内容阅读
结直肠癌(clorectal cancer,CRC)是常见的消化道恶性肿瘤之一,在全球和我国发病率和死亡率均居恶性肿瘤前列,且呈增长的趋势。对CRC发生发展的分子生物学机制进行积极探索,对CRC的预防和治疗有着非常重要的意义。SIRT3是线粒体内最主要的去乙酰化酶,调节线粒体能量代谢、细胞内活性氧(ROS)的稳态,并影响机体的衰老、细胞凋亡和肿瘤的发生等。SIRT3在口腔鳞癌、食管鳞癌等肿瘤中高表达,表现为促癌作用,而在肺癌、肝癌、乳腺癌中低表达,表现为抑癌作用。其作用不一可能与肿瘤细胞类型不同相关。目前大量研究表明SIRT3为线粒体内抑癌基因,与一些肿瘤的发生发展及预后密切相关。SIRT3基因缺失导致肿瘤细胞内ROS增加,乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)稳定,HIF-1α靶基因的表达增强,从而促使肿瘤发生。HIF-1α的靶基因有200余种,参与肿瘤的代谢、血管形成、浸润和转移等。其中葡萄糖转运体、糖酵解酶和血管内皮生长因子(VEGF)基因是维持细胞存活的关键。VEGF的表达贯穿于整个肿瘤生命周期,为肿瘤血管形成的关键调节因子,参与肿瘤的发生、浸润和转移等。然而,SIRT3在CRC中作用尚不清楚。本研究通过检测SIRT3、HIF-1α和VEGF在CRC组织及癌旁正常组织中的表达情况,初步探讨SIRT3在CRC中的作用,分析SIRT3、HIF-1α和VEGF与CRC临床基线资料和病理学参数的关系及相关性,揭示CRC的部分发病机理,探讨CRC临床治疗的新靶点。目的:通过对CRC组织及癌旁正常组织中SIRT3、HIF-1α和VEGF蛋白表达情况的检测,分析三者分别与临床基线资料和病理参数的关系,比较三者之间相关性,探讨SIRT3、HIF-1α和VEGF在CRC发生发展中的作用。方法:收集秦皇岛市第一医院自2013年9月至2014年1月手术切除,并经病理证实为CRC的66例癌组织及45例癌旁正常组织石蜡标本,备用于免疫组化pv6001二步法分别检测蛋白在组织中的表达情况。收集秦皇岛市第一医院自2013年11月至2014年1月手术中切除的新鲜组织标本,包括crc组织和相应的癌旁正常组织各20例,备用于western-blotting方法蛋白定量检测。统计学分析结合临床及病理资料和实验数据进行。结果:1免疫组化结果1.1蛋白表达情况:在crc组织中,sirt3蛋白阳性表达率为51.5%(34/66),明显低于癌旁正常组织阳性表达率86.7%(39/45),差别具有统计学意义(p<0.05);在crc组织中hif-1α和vegf蛋白阳性表达率分别为71.2%(47/66)、74.2%(49/66),均明显高于癌旁正常结组织中阳性表达率0%(0/45)、22.2%(10/35),差别均具有统计学意义(p<0.05)。1.2蛋白表达与临床基线资料和病理参数的关系:在crc组织中,sirt3蛋白的阳性表达率与年龄、性别、分化程度、肿瘤大小无关,差别均无统计学意义(p>0.05),与浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移以及tnm分期有关,差别均具有统计学意义(p<0.05);hif-1α和vegf蛋白的阳性表达率分别与年龄、性别、分化程度无关,差别均无统计学意义(p>0.05),与肿瘤大小、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移以及tnm分期有关,差别均具有统计学意义(p<0.05)。1.3三者相关性:sirt3与hif-1α蛋白之间呈负相关,r=-0.617(p<0.05);sirt3与vegf蛋白之间呈负相关,r=-0.502(p<0.05);hif-1α与vegf蛋白之间呈正相关,r=0.538(p<0.05)。2western-blotting结果2.1蛋白质表达情况:在crc组织中,sirt3蛋白的表达量(sirt3/gapdh)为0.622±0.066,明显低于癌旁正常组织0.783±0.038;hif-1α蛋白的表达量(hif-1α/gapdh)为0.373±0.049,明显高于癌旁正常组织0.142±0.030;vegf蛋白的表达量(vegf/gapdh)为0.320±0.040,明显高于癌旁正常组织0.139±0.035,差别均有统计学意义(p<0.05)。2.2三者相关性:sirt3与hif-1α蛋白之间呈负相关,r=-0.621(p<0.05);sirt3与vegf蛋白之间呈负相关,r=-0.695(p<0.05);hif-1α与vegf蛋白之间呈正相关,r=0.486(p<0.05)。结论:1在CRC中,SIRT3蛋白的表达低于癌旁正常组织,在CRC的发生发展过程中可能起抑制作用;HIF-1α和VEGF蛋白在CRC中的表达分别高于癌旁正常组织,提示HIF-1α和VEGF蛋白在CRC的发生发展过程中可能起促进作用。2在CRC中,SIRT3蛋白可能起到负向调控HIF-1α和VEGF的作用。3 SIRT3蛋白的表达可能与CRC的发生、肿瘤缺氧微环境及肿瘤血管形成有关,且可能通过HIF-1α蛋白依赖的VEGF蛋白表达水平上调影响CRC的发生发展。