目的原核表达PRAK（p38 regulated/activated protein kinase）的重组蛋白,应用杂交瘤技术制备PRAK的单克隆抗体,为其后续研究奠定实验基础。方法构建p ET28a-PRAK原核高表达质粒,并将其转化到大肠杆菌BL21（DE3）中。通过在16℃、1mmol/L异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）条件下诱导表达9-12小时,将诱导出的重组蛋白用镍亲和层析柱纯化,然后通过SDS-PAGE法和Western blot法鉴定蛋白表达方式及其可溶性。用纯化后的重组蛋白作为抗原免疫6周龄雌性Balb/c小鼠,三次免疫后用间接酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠血清效价。取血清效价最高的小鼠在细胞融合前三天注射无佐剂抗原加强免疫,然后取加强免疫后的小鼠脾细胞与处于对数生长期的骨髓瘤细胞融合,培养9-11天后,间接酶联免疫吸附法（ELISA）筛选阳性杂交瘤细胞并进行亚克隆3-4次,直至阳性率达到100%。将高压灭菌后的液体石蜡腹腔注射到8-10周龄雌性Balb/c小鼠,一周后将筛选出的状态良好的阳性杂交瘤细胞株注入小鼠腹腔,待小鼠腹部膨隆后收集腹水。结果1、双酶切鉴定及测序结果显示p ET28a-PRAK原核表达质粒构建成功。2、SDS-PAGE法和蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）鉴定表明在16℃、1m M异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达9-12h时,重组的PRAK蛋白能够以可溶性蛋白的形式在超声破碎后的上清液中大量表达,并具有较高的纯度。3、酶联免疫吸附试验（ELISA）检测免疫后小鼠血清抗体滴度,表明制备出的重组PRAK蛋白具有很好的免疫原性,能引起小鼠很强的免疫反应。结论本研究成功构建p ET28a-PRAK原核表达质粒,诱导表达出纯度较高的重组PRAK蛋白,筛选出三株杂交瘤细胞株。