研究背景人体内ATP7B基因的突变是Wilson病(肝豆状核变性)发病的根本原因,人体内铜的代谢是由一系列铜转运蛋白构成的传递链完成的,ATP7B基因突变造成ATP7B蛋白改变从而导致铜离子在体内蓄积进而造成肝脏和脑部为主的全身性病理损害。因此,作为一种单基因遗传病,肝豆状核变性最理想的治疗方法当属基因治疗。目的研究外源目的基因ATP7BcDNA在Wilson病病人离体肝细胞中的表达,观察ATP7B蛋白能否较长时间的表达,以及其表达水平的变化。方法体外培养Wilson病病人肝细胞,构建pAdxsi-GFP-ATP7B并转染肝细胞,选用免疫细胞化学技术和双抗体夹心酶免疫吸附法检测不同时间ATP7B蛋白的表达状况。结果1.体外成功分离和培养出Wilson病病人肝细胞,并通过糖原染色法证实。2. pAdxsi-GFP-ATP7B成功构建并将目的基因成功转入肝细胞。3.用免疫细胞化学技术证实肝细胞中有ATP7B蛋白的合成。4.用双抗体夹心酶免疫吸附法检测不同时间ATP7B蛋白的表达状况,其中ATP7B蛋白表达量在转染后的3-5天达到高峰,15天后表达显著下降。结论1.体外成功分离和培养出Wilson病人肝细胞。2 pAdxsi-GFP-ATP7B构建成功。3.目的基因ATP7BcDNA通过腺病毒载体成功转染入肝细胞。4.经转染后肝细胞能成功合成ATP7B蛋白,其表达量在转染后的3-5天达到高峰,14天后表达显著下降。