嗜水气单胞菌微胶囊口服灭活疫苗制备工艺的筛选及其对小鼠的免疫

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1在已获得的嗜水气单胞菌灭活疫苗Ⅰ类新兽药证书的基础上将嗜水气单胞菌灭活疫苗进行微胶囊囊化,将其制备成嗜水气单胞菌微胶囊口服灭活疫苗。以嗜水气单胞菌(Ah)J-1株为芯材及大豆蛋白、麦芽糊精和阿拉伯胶等可被生物降解的物质为壁材,利用喷雾干燥微胶囊技术制备Ah微胶囊口服灭活疫苗。结果表明,喷雾干燥条件对疫苗微胶囊颗粒影响较大;其适宜条件为:进料温度40℃,进料速度60mL/h,大豆蛋白、麦芽糊精和阿拉伯胶之间最佳比例为3/9/4,进风温度和出风温度分别为195℃和90℃;制备的微胶囊疫苗颗粒的平均粒径为4.5-16.5um,平均含菌量为2.47×1013mg-1干粉,并将其拌入饵料中制成了可以直接通过饲喂而达到免疫效果的口服灭活疫苗。2受免动物血清抗体效价是评价特异性免疫效果的一个重要指标,抗体效价的高低通常显示了免疫的成败,因此建立评价抗体水平的方法至关重要。按照嗜水气单胞菌灭活疫苗制备规程制备灭活疫苗,采用腹腔注射法免疫小鼠,第一次免疫2周后进行第二次免疫。取二次免疫后28d的小鼠血清2倍比稀释包被96孔酶标板,建立检测抗体的间接ELISA方法,测定受免小鼠特异性免疫应答水平。用传统的全菌凝集实验检测随机选取的30份免疫组血清和20份对照组血清,结果表明免疫组与对照组的血清抗体稀释最高滴度分别为1:32和1:8。用此阳、阴性血清建立间接ELISA方法,然后用该方法检测上面的50份血清。免疫组与对照组的血清抗体稀释最高滴度分别为1:4096和1:32。以上结果表明,建立的间接ELISA方法可更准确地用于微囊化口服灭活疫苗免疫小鼠的血清抗体效价检测。3以嗜水气单胞菌(Ah)J-1株为材料,分别按照嗜水气单胞菌灭活疫苗制备规程制备灭活疫苗和喷雾干燥法制备微胶囊口服灭活疫苗。160只6-8周龄雌性小鼠分为4组,分别依次为注射AhJ-1全菌灭活疫苗组、口服微胶囊口服灭活疫苗组Ⅰ、Ⅱ和空白对照组,接种小鼠数每组40只。微胶囊口服灭活疫苗及全菌细胞灭活疫苗分别以直接拌入饵料法口服和腹腔注射免疫小鼠,空白对照组注射生理盐水(NS),检测各组小鼠体液免疫水平。结果显示,用间接ELISA检测抗体水平,显示微胶囊口服灭活疫苗组Ⅰ(0.1g/只)的抗体水平高于对照组,略低于全菌灭活疫苗免疫组,但两者差异不显著(p>0.05);微胶囊口服灭活疫苗组Ⅱ(0.06g/只)的抗体水平高于对照组,低于全菌灭活疫苗免疫组,两者差异显著(p<0.05),但微胶囊口服灭活疫苗组Ⅰ和Ⅱ的抗体高效价维持时间最长即第6周。在第2次免疫后的第4周,用50LD50AhJ-1攻击,AhJ-1攻击各组的保护率依次为,全菌灭活疫苗腹腔注射组的免疫保护力最高(73.3%),其次为微胶囊疫苗组拌入饵料直接投喂组Ⅰ(0.1g/只)免疫保护力(63.3%),与全菌灭活疫苗组(73.3%)差异不显著(p>0.05);微胶囊疫苗组拌入饵料直接投喂组Ⅱ(0.06g/只)免疫保护力(40%),与全菌灭活疫苗组(73.3%)差异显著(p<0.05);空白对照组免疫保护力(0%)。表明所制备的嗜水气单胞菌微胶囊口服疫苗具有较好的癌苗性能。
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