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目的:1.探讨中药袁氏生脉成骨片治疗激素性股骨头缺血坏死(Steroid-induced Osteonecrosis of Femoral Head SONFH)的临床疗效。2.探索microRNA在SONFH患者外周血中的差异表达,分析差异表达的microRNA可能的调控作用。3.寻找中药干预SONFH兔模型中microRNA的差异表达,分析中药调控microRNA表达治疗SONFH可能的机理。方法:1.观察26例SONFH患者口服袁氏生脉成骨片每日3次,每次6粒,共服3个月,记录并比较SONFH患者服用药物前、服药1个月、服药2个月和服药3个月患侧髋关节Harris评分、VAS评分,收集数据进行统计学分析。评价服用袁氏生脉成骨片对SONFH患者髋关节Harris评分、VAS评分的影响。2.选取2014年7月~2015年2月广州中医药大学第一附属医院关节科门诊就诊的ARCOⅡ期SONFH患者6例(观察组)及同期广州中医药大学在校健康志愿者6例作为对照组。采集两组研究对象血浆,采用microRNA Real-time PCR芯片筛选差异表达的microRNA。根据TargetScan、mirBase及miRanda三个数据库预测差异表达microRNA的靶基因并进行生物信息学分析。3.选取普通级健康成年新西兰兔,体重2.5~3.0kg,雌雄各半,共30只。以随机数字表法分为中药组、对照组和空白组,各10只。中药组和对照组每只每日以内毒素10ug/kg为总量,经耳缘静脉分2次进行注射,共注射2日,于第3次注射内毒素时以甲强龙40mg/kg行臀肌注射,而后每间隔24h以甲强龙40mg/kg注射1次,共注射甲强龙3次。空白组于相同时间点注射等量生理盐水,注射期间各组兔均臀肌注射青霉素4万单位/只,预防感染。中药组于最后一次注射甲强龙时以袁氏生脉成骨片0.4片/kg灌胃,对照组及空白组以相同计量生理盐水灌胃,灌胃8周。于造模4周时,中药组与对照组各随机选取1只兔,取股骨头样品行HE染色,观察造模成功与否。灌胃完成后收集兔血浆采用高通量测序法测定其microNRA相对表达量,筛选出观察组、对照组较空白组差异表达的microRNA,获取此调控途径中的关键microRNA进行生物信息学分析。结果:1.口服袁氏生脉成骨片前、服药1个月、服药2个月、服药3个月患侧髋关节Harris评分分别为38.17±4.02,39.83±3.97、42.67±2.25和44.33±3.20,患侧髋关节VAS评分分别为6.83±0.41、6.33±0.52、5.00±0.89和4.33±0.52,服药前与服药2、3个月相比较均具有统计学差异。2.SONFH患者血浆中采用microRNA Real-time PCR芯片检测752个microRNA,两组差异表达的microRNA18个,其中观察组上调13个,下调5个。共筛选出交集靶基因887个。GO分析显示,观察组较对照组差异表达microRNA调控的靶基因功能主要包括解剖结构形态、间充质细胞增殖、细胞的代谢过程等,Pathway分析显示靶基因明显富集于多条信号通路。3.在SONFH兔模型实验中采用miRDeep2.0进行microRNA预测,共预测出887个可能microRNA。对照组与空白组之间存在差异表达的microRNA,经同源性分析筛选出与之对应的人类microRNA:hsa-miR-941和hsa-miR-187。并且hsa-miR-941和hsa-miR-187表达量在空白组、对照组和中药组间呈现先升高再回落的表达趋势。hsa-miR-187可调控细胞凋亡和血管生成。MAPK信号通路在中药组与空白组差异表达的microRNA靶基因中富集明显。结论:1.袁氏生脉成骨片可有效改善ARCOⅡ期SONFH患者患侧髋关节Harris评分和VAS评分。2.本研究发现SONFH患者血浆中microRNA较正常人出现差异表达,说明这些差异表达的microRNA可能作为筛选SONFH的生物学标志物。3.袁氏生脉成骨片通过影响microRNA的差异表达,调控多条信号通路,抑制细胞凋亡、促进血管生成可能是其治疗SONFH的作用机制。