【摘 要】
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目的研究稀土氧化钕致人支气管上皮细胞（16HBE）炎症反应中circ＿0000638的功能,探讨其可能的作用机制。方法不同剂量氧化钕处理16HBE细胞48h后,分别采用ELISA和q RT-PCR法检测IL-8和IL-1β的表达。选用80μg/ml氧化钕浓度处理16HBE细胞48h,微阵列检测其circ RNA表达谱改变并用q RT-PCR实验进行验证。circ＿0000638干扰/过表达后,采用
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目的研究稀土氧化钕致人支气管上皮细胞（16HBE）炎症反应中circ＿0000638的功能,探讨其可能的作用机制。方法不同剂量氧化钕处理16HBE细胞48h后,分别采用ELISA和q RT-PCR法检测IL-8和IL-1β的表达。选用80μg/ml氧化钕浓度处理16HBE细胞48h,微阵列检测其circ RNA表达谱改变并用q RT-PCR实验进行验证。circ＿0000638干扰/过表达后,采用ELISA和q RT-PCR法检测IL-8和IL-1β的表达改变。双荧光素酶报告基因检测miR-498-5p与circ＿0000638结合。miR-498-5p mimic/inhibitor转染后,采用ELISA和q RT-PCR法检测IL-8和IL-1β的表达改变。氧化钕处理16HBE细胞48h后,采用western blot法检测细胞中NKRF、p-IκB、p-p65蛋白的表达。circ＿0000638干扰/过表达后,采用Western blot法分别检测氧化钕处理16HBE细胞中p-IκB、p-p65蛋白表达和16HBE细胞胞质/胞核中p-p65蛋白水平。circ＿0000638 si RNA/oe RNA和miR-498-5p mimic/inhibitor联合转染后,采用western blot法检测氧化钕处理16HBE细胞后NKRF、IκB、p-IκB、p65、p-p65蛋白表达。circ＿0000638 si RNA/oe RNA和BAY11-7082联合转染后,采用ELISA法检测氧化钕处理16HBE细胞的IL-8、IL-1β的表达。结果与对照组相比,氧化钕处理48h后IL-8和IL-1β分泌明显增加（p<0.05）。不同剂量氧化钕处理16HBE细胞后,circ＿0000638表达量与氧化钕剂量呈负相关（r=-0.951,p<0.001）。circ＿0000638干扰后16HBE细胞中IL-8和IL-1β表达升高;反之,IL-8和IL-1β表达降低,差异有统计学意义（p<0.001）。双荧光素酶报告基因结果显示miR-498-5p可与circ＿0000638相相互作用。miR-498-5p高表达后16HBE细胞中IL-8和IL-1β表达升高;反之,IL-8和IL-1β表达降低,差异有统计学意义（p<0.05）。circ＿0000638干扰后16HBE细胞中p-IκB、p-p65的表达水平和胞核中p-p65的表达水平均升高;反之,p-IκB、p-p65的表达均降低,差异有统计学意义（p<0.05）。circ＿0000638干扰后16HBE细胞中NKRF表达降低,p-IκB和p-p65表达升高,加入miR-498-5p inhibitor后,NKRF的降低趋势和p-IκB、p-p65的升高趋势均减弱;circ＿0000638过表达后16HBE细胞中NKRF表达升高,p-IκB和p-p65表达降低,加入miR-498-5p mimic后,NKRF的升高趋势和p-IκB、p-p65的降低趋势均减弱（p<0.05）。BAY11-7082处理16HBE细胞后,细胞中IL-8和IL-1β的表达量均显著降低,各BAY11-7082处理组中IL-8和IL-1β的表达量无统计学差异。结论circ＿0000638可通过竞争性结合miR-498-5p调控NF-κB信号通路的激活,抑制氧化钕诱导的16HBE细胞IL-8和IL-1β的表达。
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