论文部分内容阅读
恶性肿瘤是当前危害人类健康的严重疾病,抗肿瘤化学药物在杀灭癌细胞的同时,对人体正常细胞也产生了一定的毒副作用。因此,从天然植物中寻找和提炼高效低毒的抗肿瘤药物已逐渐成为近年来国内外学者的研究热点。关于石蒜科植物提取物石蒜碱及盐酸石蒜碱,研究报道其在白血病细胞(HL-60、K562),多发性骨髓瘤细胞(KM3),卵巢癌细胞(Hey1B),非激素依赖性前列腺癌细胞(PC-3M,DU145,LNCa P,22RV1)中,均有良好的抗肿瘤功效,但作用机制不尽相同。本文选取石蒜碱及盐酸石蒜碱,探讨其抑制肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞活性及诱导细胞凋亡的分子机制。本文开展了如下实验:(1)MTT法检测不同浓度(0,2.5,5.0,10.0,20.0μM)的石蒜碱和盐酸石蒜碱处理肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞24h和48h对细胞活性的影响。(2)荧光显微镜观察浓度为0,2.5,5.0,10.0,20.0μM的石蒜碱和盐酸石蒜碱处理A549细胞和Eca-109细胞24h后AO/PI染色下的形态变化。(3)流式细胞仪检测浓度为0,1.2,2.4,4.8μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞24h后的细胞凋亡率。(4)流式细胞仪检测浓度为0,2.4,4.8μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞24h后细胞周期的变化。(5)qRT-PCR检测石蒜碱和盐酸石蒜碱(0,10μM)处理24h后,肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞内凋亡相关基因(p53,Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9)在转录水平的变化。(6)Western blot检测浓度为0,0.5,1.0μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞6h后,基因p53,因Bcl-2,Caspase-9,Cyclin D1表达量的变化以及Akt,SAPK/JNK及GSK-3β蛋白磷酸化水平的变化。本文研究结果如下:(1)石蒜碱和盐酸石蒜碱对A549细胞和Eca-109细胞活性均有明显的抑制作用,并且呈时间剂量依赖关系。(2)在不同浓度石蒜碱和盐酸石蒜碱处理下,经AO/PI染色后荧光显微镜观察发现A549细胞和Eca-109细胞发出红色荧光,凋亡小体增多。(3)经浓度为0,1.2,2.4,4.8μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞24h后,细胞凋亡率相应增高,并且呈剂量依赖关系。(4)浓度为0,2.4,4.8μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞24h后,细胞周期G1期细胞数目百分率明显上升,并且呈剂量依赖关系。(5)经石蒜碱和盐酸石蒜碱(10μM)处理24h后,肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞内凋亡相关基因p53、Bax、Caspase-3、Caspase-9的转录水平明显上调,而Bcl-2下调明显。(6)浓度为0,0.5,1.0μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞6h后,p53和Caspase-9蛋白表达量随药物浓度的增加而上升,Bcl-2和Cyclin D1蛋白表达量随药物浓度的增加而下降,SAPK/JNK和GSK-3β蛋白磷酸化水平随药物浓度增加而上升。综上所述,石蒜碱和盐酸石蒜碱可以抑制肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞的细胞活性并诱导细胞凋亡。本文的研究结果为石蒜碱及盐酸石蒜碱日后开发为新型天然抗肿瘤的潜在性提供了理论基础。